细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）检测试剂盒
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关于莱尔：
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市，国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽，多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验，致力于化学试剂行业内的发展和创新，从而大大提高了产品质量，拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队，发展迅速，为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业，涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员，多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证，致力于拓展生物化学领域，以高水准的产品为准则回馈广大用户，助跑众多新老客户的科研之路。
详细信息
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）检测试剂盒
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
AI 的最适 pH 为 3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。B-AI 存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与B-AI 活性成正比。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液 1：液体 100mL×1 瓶，4℃保存; 提取液 2：液体 100mL×1 瓶，4℃保存; 试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液 1 体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液 1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 提取液 2 充分混匀，4℃浸提过夜， 12000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）检测试剂盒测定步骤和加样表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μ L） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 |
| 200 |
试剂二 | 200 |
|
混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
试剂三 | 125 | 125 |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μ L 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 510nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，Δ A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）检测试剂盒活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x 为标准品浓度（μ g/mL），y 为吸光值。
（1） 按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μ g 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性（μ g /min/mg prot）＝[(Δ A +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(Δ A
+0.001) ÷Cpr
（2） 按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g 组织每分钟产生 1μ g 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性（μ g /min /g 鲜重）＝[(Δ A +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(Δ A
+0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr： 样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x 为标准品浓度（μ g/mL），y 为吸光值。
（1） 按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μ g 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性（μ g /min /mg prot）＝[(Δ A +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(Δ A
+0.001) ÷Cpr
（2） 按鲜重计算：
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）检测试剂盒单位的定义：37℃每g 组织每分钟产生 1μ g 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性（μ g /min /g 鲜重）＝[(Δ A +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)=41.6×(Δ A
+0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr： 样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
