谷氨酸脱氢酶（GDH）检测试剂盒
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关于莱尔：
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市，国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽，多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验，致力于化学试剂行业内的发展和创新，从而大大提高了产品质量，拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队，发展迅速，为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业，涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员，多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证，致力于拓展生物化学领域，以高水准的产品为准则回馈广大用户，助跑众多新老客户的科研之路。
详细信息
谷氨酸脱氢酶（GDH）检测试剂盒紫外分光光度法活性检测说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理：
GDH催化NH4+ 、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存。
谷氨酸脱氢酶（GDH）检测试剂盒粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液的配制：临用前将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；
（2）取 0.05mL样本和1mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算 ΔA=A1-A2。
GDH 活性计算：
1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=675×ΔA
谷氨酸脱氢酶（GDH）检测试剂盒2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=675×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V 样总) ÷T
=675×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V样总×500) ÷T
=1.35×ΔA
谷氨酸脱氢酶（GDH）检测试剂盒V 反总：反应体系总体积，1.05×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万
