蔗糖酶检测试剂盒
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关于莱尔：
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市，国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽，多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验，致力于化学试剂行业内的发展和创新，从而大大提高了产品质量，拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队，发展迅速，为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业，涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员，多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证，致力于拓展生物化学领域，以高水准的产品为准则回馈广大用户，助跑众多新老客户的科研之路。
详细信息
蔗糖酶检测试剂盒注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
提取液:液体50mLx1瓶，4℃保存；
试剂一:液体3mLx1瓶，4℃保存；
试剂二:粉剂x1支，4℃保存，用时加入2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃可保存一周；
试剂三:液体3mLx1瓶，常温保存；
标准品:粉剂x1支，4℃保存，用时加入lml蒸馏水充分溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明:
蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
蔗糖酶检测试剂盒试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、可调式移液器、玻璃微量比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备:
1. 样品的准备:
按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入lmL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g4C离心10min,取上清，置冰上待测。
2. 标准品的制备:
将标准品用蒸馏水稀释至3、2、1.5、1、0.5、0.25、0mg/mL(0mg/mL 为空白管)绘制标准曲线。
二、加样表和测定步骤:
试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 | 标准品 |
试剂一 | 10 | 10 | 10 |
蒸馏水 | 10 |
|
|
样本 | 20 | 20 |
|
标准品 |
|
| 20 |
试剂二 |
| 10 | 10 |
置于25℃准确水浴10min | |||
试剂三 | 20 | 20 | 20 |
混匀，100℃水浴10min左右（盖紧，防止水分失散），冷却至室温 | |||
蒸馏水 | 140 | 140 | 140 |
蔗糖酶检测试剂盒混匀，540nm蒸馏水调零，测定各管吸光值，ΔA=A 测定-A对照，每个测定管设一个对照管。标准曲线的建立:以标准品的浓度为x轴，540nm下的吸光度(ΔA标准=A标准管-A空白管)为y轴，绘制标准曲线。
三、蔗糖酶活力计算:
1、根据标准曲线，将△A(y)带入公式中计算出x值(mg/mL)
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解lug蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(ug/min/mg prot）=(1000×x×V1)÷(V1×Cpr)÷T=100×x÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(ug/min/g鲜重)=(1000×x×V1)÷(V1×W)÷T=100×x÷W
蔗糖酶检测试剂盒1000: 1mg/mL=1000ug/mL: V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL； V2：加入提取液体积，1mL；T:反应时间，10min； Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL； W:样本鲜重，g。
