关于莱尔:
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市,国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽,多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验,致力于化学试剂行业内的发展和创新,从而大大提高了产品质量,拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队,发展迅速,为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业,涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员,多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证,致力于拓展生物化学领域,以高水准的产品为准则回馈广大用户,助跑众多新老客户的科研之路。
土壤蔗糖酶(S-SC)检测试剂盒说明书,正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收,其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度密切关,是评价土壤肥力的重要指标。
测定原理:
S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与S-SC 活性成正比。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
土壤蔗糖酶(S-SC)检测试剂盒试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 1mL×1 瓶,4℃保存;(自备)试剂二:液体 7.5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 22mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂四:液体 22mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定步骤和加样表:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.03 | 0.03 |
试剂一(μ L) | 5 | 5 |
振荡混匀,使土样全部湿润,37℃水浴 15min
试剂二(μ | L) | 75 | 75 |
试剂三(μ | L) | 220 |
|
蒸馏水(μ | L) |
| 220 |
充分混匀,放入 37℃水浴培养 24 小时,10000 g,4℃,离心 5min,取上清液
上清液(μ L) | 85 | 85 |
试剂四(μ L) | 215 | 215 |
土壤蔗糖酶(S-SC)检测试剂盒充分混匀,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,蒸馏水稀释 10 倍(可以吸取 100μ L,加入 900μ L 蒸馏水稀释;若吸光度大于 4,可以加大稀释倍数),取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中 510nm 处读吸光值 A。计算 Δ A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
S-SC 活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 4.9x -0.062;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。单位的定义:每天每g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。
S-SC 活力(mg/d/g 土样)=( Δ A+0.062) ÷4.9×10×V 反总÷W÷T =20.4×(Δ A+0.062)
10:稀释倍数;T:反应时间,1d; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样本质量,0.03g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
土壤蔗糖酶(S-SC)检测试剂盒标准条件下测定的回归方程为y = 2.45x -0.062;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。单位的定义:每天每g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。
S-SC 活力(mg/d/g 土样)=( Δ A+0.062) ÷2.45×10×V 反总÷W÷T =40.8×(Δ A+0.062)
10:稀释倍数;T:反应时间,1d; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样品质量,0.03g。