中性、碱性土壤速效磷试剂盒-微量法
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详细信息
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-微量法测定意义
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
测定原理
用弱碱性提取碱溶性磷和吸附态磷，用钼锑抗比色法测定。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪。
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-微量法试剂组成和配制
提取液：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 6mL×1 支，4℃保存。
试剂二： 粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水溶解。用不完的试剂 4℃保存。
试剂三： 粉剂×3 支，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解。现配现用。
样本处理
新鲜土样风干，过 30-50 目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为 1：20 的比例（建议称取约 0.05g 土样，加入 1mL 提取液），振荡提取 1h，10000g ，25℃离心 10min，取上清液待测。
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-微量法测定步骤
1、 显色液的配制（可测 50 个样）：取 EP 管一支，加入 660μL 试剂一，再加入 100μL 试剂二，充分混匀后，再加入 240μL 试剂三，充分混匀待用；配好的显色液应为黄色，若变蓝则为磷污染；显色液必须现配现用；若一次性测不了 50 个样，可按比例缩小各试剂体积。
2、 操作表
空白管 | 测定管 | |
样本（μL） | 40 | |
提取液（μL） | 40 | |
显色液（μL） | 20 | 20 |
H2O（μL） | 140 | 140 |
充分混匀，25℃静置 30min | ||
于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定 660nm 处吸光值 A，分别记为 A 空 白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。 | ||
计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1164x-0.012，R2 = 0.9958，x 为标准品浓度（mg/L），y 为吸光值。速效磷含量（mg/kg 干重）=（△A+0.012）÷ 0.1164×V 样÷（W×V 样÷V 样总）
= 8.591×（△A+0.012）÷W
V 样：加入反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量， 约 0.05g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0582x-0.012，R2 = 0.9958，x 为标准品浓度（mg/L），y 为吸光值。
速效磷含量（mg/kg 干重）=（△A+0.012）÷ 0.0582×V 样÷（W×V 样÷V 样总）
= 17.182×（△A+0.012）÷W
V 样：加入反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量， 约 0.05g
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-微量法注意事项
1.配好的显色液当天用完，变蓝则不能使用。
2.最/低检出限为 0.2μg/mL。
