土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)检测试剂盒
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生产厂家关于莱尔:
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市,国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽,多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验,致力于化学试剂行业内的发展和创新,从而大大提高了产品质量,拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队,发展迅速,为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业,涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员,多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证,致力于拓展生物化学领域,以高水准的产品为准则回馈广大用户,助跑众多新老客户的科研之路。
土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)检测试剂盒说明书,正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化, 其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理:
酸性条件下,S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。
土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)检测试剂盒自备实验用品及仪器:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水
试剂组成和配置:
液体一:1mL×1 支,4℃保存。液体二:0.5mL×1 支,4℃保存。
试剂一的配制:临用前按液体一:液体二:蒸馏水=90(μ L):20(μ L):21(mL)的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 5ml 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 50μ L 试剂七使粉剂润湿,然后加入 10ml 试剂一,转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 20ml 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;
试剂六:液体 1.5mL×1 支,0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液,4℃保存; 试剂七:液体 1.5mL×1 支,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定操作:
1、 试剂一的配制:见试剂的组成和配制。
2、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。
3、试剂二、三和四 40℃水浴 10min。
3、样本测定:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.01 | 0.01 |
试剂一(μ L) | 50 | 150 |
试剂三(μ L) | 100 |
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土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)检测试剂盒混匀,40℃水浴 30min,振荡 5-6 次,使土样与反应液充分接触
试剂二(μ L) | 50 | 50 |
混匀,8000g25℃离心 10min,取上清液,在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂
| 测定管 | 对照管 | 标准管 |
上清液(μ L) | 30 | 30 |
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试剂六(μ L) |
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| 30 |
试剂四(μ L) | 140 | 140 | 140 |
试剂五(μ L) | 30 | 30 | 30 |
混匀,40℃水浴 20min,680nm 下读取各管吸光值A 注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ACPT 活性计算:
单位定义:每天每g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-ACPT 活力单位。
S-ACPT(mg/d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管
土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)检测试剂盒C 标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.2mL;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.01g。