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简述牛肿瘤坏死因子α ELISA 检测试剂盒实验操作

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2012/8/9 14:37:06>> 进入商铺
  简述牛肿瘤坏死因子αELISA检测试剂盒实验操作
  
  试验原理:
  
  TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。
  
  操作注意事项:
  
  l试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
  
  l实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
  
  l不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  
  l使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
  
  l使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  
  l底物A应挥发,避免长时间打开盖子。牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
  
  l加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
  
  按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
  
  安全性:
  
  1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
  
  2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
  
  3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
  
  操作步骤:
  
  1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  
  2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  
  3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
  
  4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  
  5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  
  6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  
  7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
  
  8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  
  在450nm波长处测定各孔的OD值。
  
  牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒

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