抚生大肠杆菌抽取RNA方法
 
    方法步骤：
    大肠杆菌pQG11/M15[pREP4] 的培养：
    1) 将pQG11/M15[pREP4] 接种于2 mL含ampicillin (100 μg/mL) 及kanamycin(25 μg/mL) 的LB培养液，于37℃震荡培养过夜。
    2) 隔日早晨，取0.5 mL pQG11/M15[pREP4] 过夜培养液，加入25 mL 含有ampicillin (100 μg/mL) 与kanamycin (25 μg/mL) 的LB 培养液，于37℃震荡培养2 h。
    3) 加入25 μL 1 M IPTG，继续放置于37℃震荡培养。
    4) 经过4 h 后，取出pQG11/M15[pREP4] 培养液，开始进行RNA 制备工作。
    制备RNA：注意！进行以下RNA 制备实验时，除了使用依上述步骤所准备的pQG11/M15[pREP4] 培养液外，请记得向助教領取未经IPTG 诱导的pQG11/M15[pREP4] 培养液当做对照组。
    1) 取出4 支1.5 mL 微量离心管，分别标示为I-1, I-2, U-1 与U-2。
    2) 取3 mL 经IPTG 诱导的pQG11/M15[pREP4] 培养液平均分置于微量离心管I-1 与I-2。
    3) 取3 mL 未经IPTG 诱导的pQG11/M15[pREP4] 培养液平均分置于微量离心管U-1 与U-2。
    4) 以8,000 rpm (4℃) 离心5 min，小心倒掉上清液，并以微量移液器尽量吸掉残留的液体。
    5) 各加入0.5 mL protoplasting buffer，以微量移液器将大肠杆菌充分悬浮。
    6) 再加入1 mL protoplasting buffer 与12 μL 50 mg/mL lysozyme，混合均匀的后，移置于冰浴中作用15 min。
    7) 以7,000 rpm 于4℃离心5 min。
    8) 小心倒出上清液，并以微量移液器尽量吸掉残留的液体。
    9) 各加入75 μL gram-negative lysing buffer 及2 μL DEPC，以微量移液器小心悬浮沉淀于管底的大肠杆菌原生质体，并离心数秒。 在以微量移液器悬浮大肠菌原生质体时，一旦pellet 被充分打散即应停止悬浮动作，以避免大肠菌DNA 断裂可能造成的问题。 DEPC 可能是一种致癌物质，使用时请在抽气橱内操作。
    10) 将微量离心管放入37℃恒温水槽作用5 min。
    11) 作用完毕的后，将离心管移到冰浴中静置5 min。
    12) 加入38 μL 饱和氯化钠溶液，以手指头轻弹管壁，充分混合均匀。
    13) 静置于冰浴中作用10 min，此时应有白色沉淀出现。
    14) 以13,000 rpm 于4℃离心10 min。
    15) 将上清液移至新的微量离心管，并加入0.3 mL 酒精。
    16) 混合均匀后将离心管放置于 -20℃过夜，以便沉淀RNA。 RNA 在酒精内相当稳定，若须长期保存，可停在这一步。
    17) 以14,000 rpm 于4℃离心15 min。
    18) 小心倒掉上清液后，加入300 μL 70%酒精。
    19) 以14,000 rpm 于4℃离心5 min 的后，小心倒掉上清液。
    20) 将微量离心管倒置于桌面上30 min，以便风干RNA。
    21) 将RNA溶解于30 μL dH2O/DEPC。
    22) RNA定量：取5 μL RNA，加入995 μL dH2O/DEPC稀释的后，以分光光度计测其在260 nm与280 nm的吸光值 (记得使用石英测光管)，并计算RNA的浓度与A260/A280的比值。 RNA溶液在260 nm的吸光值为1.0 时，则浓度相当于40 μg/mL，而其A260/A280的比值应为1.7~2.0 (DNA则为1.8 左右)。 这四个RNA 样本将于后续实验中，分别以甲醛洋菜胶体电泳进行分析