大鼠端粒酶ELISA试剂盒具体操作步骤
时间:2024-10-28 阅读:32
大鼠端粒酶ELISA试剂盒具体操作步骤:
1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,生物su标记的抗-IgG抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。
5. 加生物su标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物su标记的抗-IgG抗体50μl(空白孔除外)。37℃温育30分钟
6. 洗涤:操作同4。
7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP(空白孔除外),轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
8. 洗涤:操作同4。
9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
12. 计算
13. 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。