细胞培养芯片-BE-GRADIENT

概述

BE-GRADIENT是一种在仿生条件下用于细胞培养的多功 能微流控芯片。它允许在化学梯度下进行细胞培养。所使用聚合物材料的光学透明度使得使用相差、荧光和共聚焦显微镜来监测实验成为可能。 典型应用实例有细胞/球体的侵袭和迁移、新陈代谢、血管 生成、趋化、局部缺血、细胞分化或氧化应激。

材质

BE-GRADIENT芯片由生物相容性材料制成，且气体不渗 透，可以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光学性能， 具有高透明度和低自荧光。

技术特点

产品经过消毒(每盒10片)。常温(15-25℃)下，避免阳光直射，干燥处 存放。

细胞培养涂层

BE-GRADIENT芯片经过处理，表面亲水，便于用水溶液和/或凝胶填 充，以促进细胞粘附。

如果需要特定包被涂层，根据厂家说明准备涂层溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并应用到每个通道。 吸出涂层溶液，使用通道体积5-10倍的蒸馏水或PBS洗涤，去除多余的涂层溶液。

填充和处理

1. 从的入口填充通道，确保流动方向与箭头(A)指示的方向 一致。

2. 为了更好的应用芯片，腔室内应保持干燥(B)。

3. 用P-100移液管取30 ~ 50μL溶液。建议在通道中使用带有 细胞的水凝胶溶液，将微型移液管的插入通道入口。

4. 慢慢按压移液管活塞将溶液注入芯片(C, D)。首先，弯液面进 入腔体(E, F)。继续注入，直到中心通道被填满(G, H)。

5. 在通道入口和出口滴入培养液，以避免过程中蒸发。 如果是3D细胞培养，建议每10-15秒翻转芯片2-3分钟，以获得 均匀的细胞分布，防止细胞沉降在芯片底部。然后将芯片置于 37ºC培养箱中孵育30分钟或待凝胶聚合完成。 如果是2D细胞培养，在填充侧通道之前，保证细胞附着在表面 (必要条件下)。所需时间因细胞类型而异。 一旦通道填充满，按照以下步骤处理外侧通道:

6. 用P-100或P-1000移液管取200 μL的培养液加到同侧的储液池中。 培养液流过通道，到达出口储液池。注意把一侧储液池填满， 并保持同一通道另一侧的储液池空着。在培养液体积相同的两 个储液池中，流量是相等的。可以用摇杆控制把培养液从一个 储液池移到另一个储液池。当每个储液池的最终体积为100 μl 时，可以采用45°倾角。

7. 如果将芯片连接到流体控制系统，那么使用毛细管连接通道入 口和出口。入口和出口均连接到外径2.4 mm的毛细管上。注意， 在使用流体控制系统之前，芯片和毛细管内须充满培养液。 连接毛细管后，系统封闭，可以从储液池中取出培养液。

注意：为防止过程中产生气泡，请避免将移液管倒空。当从吸液口移开 移液管时，紧紧握住柱塞，以免负压将溶液吸走。 流体控制系统的配置 Beonchip对流体控制系统的配置提出了一些建议。 前处理: 1. 在培养箱中预热毛细管和流体控制元件15-20分钟。

流体控制系统的配置

Beonchip对流体控制系统的配置提出了一些建议。 前处理: 1. 在培养箱中预热毛细管和流体控制元件15-20分钟。

2. 将系统放置在超净台中。

3. 在安装流体控制系统之前，细胞须良好地粘附在表面。

4. 芯片内部或入口/出口填充满培养液。

组装流体控制系统，需考虑以下事项:

1. 将入口填满培养液，防止有气泡残留。

2. 在组装系统之前，先将连接到入口的毛细管准备好。

3. 入口和出口都连接外径2.4 mm的接头。当系统准备好，将接头连 接在进口。过程中须非常小心，以确保没有气泡进入系统。

4. 将毛细管连接到出口，封闭系统。

5. 检查系统是否有泄漏。在将系统放入生物反应柜或培养箱之前， 让泵运行几分钟。

细胞接种

为了在3D环境中培养，需要制备含有细胞的水凝胶混合物。 下面的参考文献详细介绍了BE-GRADIENT芯片的接种协议： 1. chip: Generating pseudopalisades and enhancing aggressiveness through blood vessel obstruction events. Neuro Oncol 19 (4): 503-513. doi: 10.1093/neuonc/now230 2. Ayuso JM, Virumbrales-Muñoz M, Lacueva A, Lanuza PM, ChecaChavarria E, Botella P. et al. (2016) Development and characterization of a microfluidic model of the tumour microenvironment. Sci. Rep. 6, 36086; doi: 10.1038/srep36086 (2016) 3. Ayuso JM, Basheer HA, Monge R, Sánchez-Álvarez P, Doblaré M, Shnyder SD, et al. (2015) Study of the Chemotactic Response of Multicellular Spheroids in a Microfluidic Device. PLoS ONE 10(10): e0139515. doi:10.1371/journal.pone.0139515

细胞显微观察的准备

可监测固定的或活的细胞和化学梯度。传统细胞培养中使用的大多数 监测系统都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。细胞活力可以用不同的染料来评估。此外，免疫荧光染色可识别特异性靶点。 细胞周期荧光记录仪也可以使用。

其他读数

可以复苏细胞，以便进行下游应用，如流式细胞，RNA提取(PCR)… 欲了解更多信息，请联系BEC