细胞培养芯片-BE-FLOW

概述

BE-FLOW是一种用于仿生条件下细胞培养的多功能微流控芯片。它能在体外模拟流动和剪切应力的生理环境。在流动条 件下，实现在两个独立通道中进行长期的2D或3D实验。 典型应用实例包括细胞粘附到血管内皮的过程(感染、细胞 治疗、转移等)。

材质

BE-FLOW芯片由生物相容性材料制成，且气体不渗透，可 以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光学性能，具有高 透明度和低自荧光。

技术特点

BE-FLOW包括2个独立的通道，带有螺旋状的进口和出口 储液池，用于连接接头和毛细管路。防蒸发储液池位于培养液 储液池旁边，培养期间，毛细管封闭系统之前，将PBS或水灌满防蒸发储液池。

产品经过消毒(每盒10片)。常温(15-25℃)下，避免阳光直射，干燥处 存放。

细胞培养涂层

BE-FLOW芯片经过处理，表面亲水，便于用水溶液和/或凝胶填充， 以促进细胞粘附。 如果需要特定包被涂层，根据厂家的说明准备涂层溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并应用到每个通道。 吸出涂层溶液，使用通道体积5-10倍的蒸馏水或PBS洗涤，去除多余的涂 层溶液。

填充和处理

1. 对细胞进行裂解和计数。细胞浓度随细胞类型而变化。 建议在2-3天内接种细胞以获得融合层。 2. 用P-100或P-1000移液管取100 μL带细胞的培养液，加到进样口。 让培养液通过通道流到出口。在防蒸发储液池中加水或PBS以避 免蒸发。 3. 细胞粘附于表面(时间因细胞类型而异)。 4. 如果不连接流体控制系统，请在培养液储液池中添加所需的培养 液。为此，在进口旁边的培养液储液池中小心地添加培养液，压 力差将平衡进口和出口之间的培养液。 5. 如果连接流体控制系统，将接头分别接在出口和进口(按此顺序)。 入口和出口设计为标准连接(UNF 1/4”- 28)。请记住，在连接设备 和毛细管之前，须先将储液池填充。也可以用摇床把介质从一个储液池移到另一个储液池。当每个储液池 的最终体积为100 μl时，可以施加45°倾角。

流体控制系统的配置

Beonchip对流体控制系统的配置提出了一些建议。

前处理:

1. 在培养箱中预热毛细管和流体控制元件15-20分钟。

2. 将系统放置在超净台中。

3. 在安装流体控制系统之前，细胞须良好地粘附在表面。

4. 芯片内部或入口/出口需要填充满培养液。

组装流体控制系统，需考虑以下事项:

1. 将入口填满培养液，防止有气泡残留。

2. 在组装系统之前，先将连接到入口的毛细管准备好。

3. 入口和出口都连接标准接头(UNF 1/4”- 28)。当系统准备好，将接 头连接在进口。过程中须非常小心，以确保没有气泡进入系统。

4. 将毛细管连接到出口，封闭系统。

5. 检查系统是否有泄漏。在将系统放入生物反应柜或培养箱之前， 让泵运行几分钟。 注意：为防止过程中产生气泡，请避免将移液管倒空。当从吸液口移开 移液管时，紧紧握住柱塞，以免负压将溶液吸走。

细胞接种

血液动力学与血管内皮的相互作用是心血管功能中需要考虑的重要因 素。来自动脉血管内壁的血管内皮细胞暴露在血液流中，血液流作为切向 力(切应力)作用于内皮细胞表面。在机械刺激下，细胞可以通过机械转导 过程调节多种生物反应。BE-FLOW由两个独立的通道组成。每个通道都 有一个入口和出口储液池，可以与一个流体控制系统连接，模拟血管的框 架。在ECM涂覆表面上接种内皮细胞，以满足细胞类型对生长和粘附的 特定需求，使在不同的生理和病理流速下重建一个动态环境成为可能。

细胞显微观察的准备 可监测固定的或活的细胞和化学梯度。传统细胞培养中使用的大多数 监测系统都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。细 胞活力可以用不同的染料来评估。此外，免疫荧光染色可识别特异性靶点。 细胞周期荧光记录仪也可以使用。 其他读数 可以复苏细胞，以便进行下游应用，如流式细胞术，RNA提取 (PCR)… 欲了解更多信息，请联系BEC。