LU99A人大细胞肺癌细胞

　　平台编号:zl-077244

　　规格:1×10⁶cells/T25培养瓶

　　生长特性：贴壁生长

　　培养体系：PRMI-1640+10%FBS

　　冻存条件：无血清细胞冻存液

　　传代方法：第yi次建议1:2传代

　　冻存条件：细胞库无血清冻存液

　　细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。

　　培养备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养

　　细胞收到后处理

　　细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完qjuan养液并封好瓶口是细胞运输的最hao办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完quan培养液收集至离心管中，加入6ml完quan培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完quan培养基，另外一瓶用自己配的完quan培养基）

　　细胞培养步骤

　　一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完quan培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完quan培养基终止消化。

　　3.轻轻吹打细胞，完quan脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。

　　b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

　　方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

　　PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完quan培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

　　三、细胞冻存：（注：非无血清冻存液方法，无血清冻存液方法请参考）

　　1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

　　2、添加0.25%胰蛋白mei消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完quan培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

　　4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃。

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