ELISA试剂盒将出现假阳性结果及Elisa标准品管理详解
时间:2023-11-22 阅读:347
ELISA试剂盒将出现假阳性结果及Elisa标准品管理详解
Elisa试剂盒出现的假阳性结果:
ELISA检测试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐,因此需经扩散
才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA检测试剂盒反应总是需要一定时间的温育。
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用高的温度。抗原抗体反应4℃为*,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中,以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA试剂盒中一般不予采用。
ELISA的标准品管理:
实验新手在正式操作实验之前,需要了解学习实验的原理、结果等,而产品的正确保存也是实验结果因素之一。在接触标准品之前,我们首先要掌握标准品管理的明细要求与质量标准。
一、管理明细
①:应密封存放在无霜冰箱内,检定菌应存放在冰箱3~5℃之间。
②:标准滴定液,应由QC主管负责人配制、标定,定期3个月后复标,并作好其配制,标定和复标的完整原始记录。若贮存期发现混浊、沉淀、变色等异常情况,应及时处理。
二、配制质量要求
①:配制不需标定的标准液可采用分析纯物质进行配制。其配制用水应为符合药典要求的纯化水。
②:标定标准滴定液必须使用基准物质。为防其存放后可能吸潮,标定前应干燥至恒重。
③:根据药典规定:配制高氯酸滴定液时应在常温下进行,使用时温度与标定温差过大(不超过4℃或超过10℃以上),应折算或重新标定。
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