Elisa实验：ELISA实验的基质效应及常见问题解析

　　在ELISA实验中，偶尔会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象，特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。

　　那什么是基质效应呢?

　　基质效应：

　　分析中，基质指的是样本中被分析物以外的组分，基质常常对分析物的分析进程有显着的烦扰，并影响分析成果的准确性，这些影响和烦扰被称为基质效应。

　　仿照物与被测样本在蛋白丰度、复杂性、pH等要素都会存在差异。当单个样本或少量样本值低于空白值时，可能是过错要素，这时应增加重复，进步操作技术。当许多样本都低于空白值时，应思考基质效应的影响，建立校正曲线予以修改。

　　ELISA试剂盒在开发进程中，标准品不能选用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液，只能选用其仿照物。当样本的基质与其仿照物对比，下降抗原抗体的联络，便产生了样本值低于空白值的现象。构成样本值无法计算出数值，或许数值为负。

　　如今常用的去掉基质效应的方法是，经过已知分析物浓度的标准样品，一同尽可能坚持样本中的基质不变，建立一个校正曲线。

　　如何去判断是否是基质效应呢?

　　当单个样本或少量样本值低于空白值时，可能是实验操作出现问题，这时应增加重复，进步操作技术。当许多样本都低于空白值时，应思考基质效应的影响，建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂，有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降，便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值，或许数值为负。虽然原因复杂，但有方法可以用来评估基质效应。

　　01第一种：线性稀释

　　一般来讲，抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结合比例的减少，测量值也相应地产生很大改变。

　　02 第2种：掺入回收率实验

　　将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%，才符合标准。

　　如何避免基质效应：

　　基质效应可以通过产品研发阶段的优化尽可能去消除的。泽叶生物针对ELISA产品研发进行了多种优化。ELISA试剂盒在开发进程中，标准品不选用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液，只能选用其仿照物。我们量身定制的缓冲液系统，这些优化后的缓冲液体系能很好消除基质效应。还有当检测某个分析物时，其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合，也会导致基质效应，我们也因此做了大量的交叉反应，确保没有明显的交叉反应和干扰。而且我们试剂盒必须通过严格的基质效应测试，全部包括线性稀释和掺入回收率实验，并把测试结果记录在说明书中。

　　ELISA 操作常见问题及解决办法：

　　在确定 ELISA 试剂盒为真的情况下，应严格按照说明书进行操作，比如使用干净容器和要求的水质配置缓冲液等，主要注意要点如下：

　　移液操作时，酶标板孔中要垂直悬空加入液体，避免加到孔壁上。

　　实验前将所有试剂平衡至室温。

　　标准品粉末溶解前需要先短暂离心，使管内标准品全部集中在管底。

　　实验要做复孔，减少误差。

　　振荡孵育，加强反应。

　　每次洗板必须将洗液弃干净。

　　酶标仪检测前预热，双波长检测。

　　注意显色判断，适时终止。

　　但有时即使按照说明书操作，仍然会出现诸多问题，可以按照问题类别逐一进行排查。

　　ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。