实验原理：油红O染色实验步骤及注意事项

　　油红O脂肪染色法通常应用于检测组织或细胞内的脂肪情况，油性红O(Oil Red O)是一种脂溶性染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，在脂肪内能高度溶解，其染色原理是油红O能特异性地与组织和细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白产生吸附作用从而使脂肪染色。染料在胞内脂质中的溶解度较溶液更大，当燃料加入组织切片时，燃料从有机溶剂转移而溶于组织内的脂质中，使组织内的脂肪呈红色。该染色方法用于分析细胞样品中脂质状况。染色液

　　油红O染色液实验操作方法：

　　(1)冰冻切片厚度 6～10µm，不固定或 10%福尔马林固定 10min后水洗

　　(2)切片加入60%的异丙醇内浸洗 2min

　　(3)用蒸馏水稍微清洗一遍

　　(4)切片加入改良油红 O 染色液中，密闭染色 10～15min，该过程注意避光

　　(5)用蒸馏水清洗一遍

　　(6)加入 60%的异丙醇内稍洗以去除染液(大约几秒)

　　(7)加入冰蒸馏水中稍微清洗一遍

　　(8)Mayer 苏木素染色液复染核 5min

　　(9)用蒸馏水清洗一遍

　　(10)片子用滤纸吸干水分

　　(11)用甘油明胶封片。

　　注意事项：

　　1. 石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡，二甲苯是有机溶剂，会把中性脂肪溶解;

　　2. 冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，原因在于若选择液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程比较缓和，染出来的片子比较好看;

　　3. 切片的厚度要稍微厚一些，建议选择8-10μm;

　　4. 实验设计建议设计阴性对照和阳性对照，如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等，阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。

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