植物中脂氧合酶(LOX)试剂盒的测定原理是什么?

　　测定意义： LOX 广泛存在于动植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在生物体 的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

　　测定原理： LOX 催化亚油s氧化，氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰;测定 280nm 吸光度增加速率， 来计算 LOX 活性。

　　自备仪器和用品： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调 式移液枪和蒸馏水。

　　试剂组成和配制：

　　试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

　　试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1 支，4℃保存。

　　粗酶液提取： 按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

　　测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 280 nm，蒸馏水调零。

　　2. 在试剂三中加入 10mL 试剂二(振荡混匀 1min)，在 30℃水浴中预热 10 min 以上。用不 完的试剂 4℃保存。

　　3. 对照管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂二，30℃反应 30min 后，记录 A 对照。

　　4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂三，30℃反应 30min 后，记录 A 测定。 5. ΔA=A 测定-A 对照

　　LOX 活性计算：

　　(1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr

　　(2)按照样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。

　　LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL

　　需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒; V 反总：反应体系总体积，200μL=0.2mL;V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL; W ：样品质量，g;V 样总：上清液总体积，1mL;T：反应时间，30min。

　　植物中脂氧合酶试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。