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植物中脂氧合酶(LOX)试剂盒的测定原理

时间:2023-08-17      阅读:579

  植物中脂氧合酶(LOX)试剂盒的测定原理


  测定意义: LOX 广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体 的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

  测定原理: LOX 催化氧化,氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰;测定 280nm 吸光度增加速率, 来计算 LOX 活性。

  自备仪器和用品: 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调 式移液枪和蒸馏水。

  试剂组成和配制:

  试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

  试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。 试剂三:粉剂×1 支,4℃保存。

  粗酶液提取: 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

  测定: 1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 280 nm,蒸馏水调零。

  2. 在试剂三中加入 10mL 试剂二(振荡混匀 1min),在 30℃水浴中预热 10 min 以上。用不 完的试剂 4℃保存。

  3. 对照管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂二,30℃反应 30min 后,记录 A 对照。

  4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂三,30℃反应 30min 后,记录 A 测定。 5. ΔA=A 测定-A 对照

  LOX 活性计算:

  (1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr

  (2)按照样本质量计算 活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。

  LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL

  需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒; V 反总:反应体系总体积,200μL=0.2mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL; W :样品质量,g;V 样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间,30min。

  试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

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