古朵生物：ELISA检测试验四种常用方法的优缺点

　　ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上，再加入一级检测抗体(primarydetection Ab)，形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate)，作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。

　　1.直接法(direct ELISA)

　　将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

　　优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

　　缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。

　　2.间接法(indirect ELISA)

　　此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

　　优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。

　　缺点：交互反应发生的机率较高。

　　3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)

　　被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。

　　优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。

　　缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

　　4.竞争法(competitive ELISA)

　　样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

　　优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

　　缺点：整体的敏感性和专一性都较差。

　　最新ELISA技术：

　　基于细胞法(cell-based ELISA)：

　　是一种新的定性蛋白检测技术，将细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需抽提蛋白和裂解细胞，便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。

　　优势：无需裂解细胞，所以目标蛋白损失最少，可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

　　缺点：不能测定抗原量。

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