高效液相色谱法和核磁共振谱法的优缺点分析
时间：2024-11-15 阅读：19
NMR是测定分子结构的的方法之一，具有简单、准确、专一性高和不破坏样品等特点。不仅已被用以定量测定大量的药理活性药物，还能区分及定量测定一些药物的立体异构体。表明此方法作为一种药物的定量方法具有简单易行、结果准确的优点，还可用做某些没有对照品的药物定量方法的补充。
NMR与HPLC、GC、SFE、SFC、GPC、CE等的联用使快速高效分离与强有力结构分析有机的结合。而HPLC与NMR的联用设想则早始于20世纪70年代，80年代初布鲁克公司就以其世界的NMR技术为基础，首先开发了LC／NMR技术。近年来，NMR和色谱法联合使用的这一技术更为成熟，经过不断改进和完善，全自动操作、常规使用的HPLC／NMR谱仪已遍及，液相色谱是分离复杂混合物的最好方法，而NMR是结构分析强有力的工具，两者联用是科学家们长期以来的愿望。
典型的高效液相色谱与核磁共振联用仪。液相色谱包括：HPLC自动进样器，HPLC泵，色谱柱和恒温箱，非NMR检测器，如UV(紫外一可见)等。流动液从检测器进入HPLC／NMR接口，接口中附设了用于中间存储HPLC峰的环路(LOOP)，从HPLC／NMR接口出来引至带流动池的NMR探头或废液收集器。通过探头后，流动液进入馏分收集器回收，并进一步用各种NMR技术对各色谱峰进行研究。在HPLC与NMR接口处的分流器(splitter)上还可连接质谱仪，进一步成为LC—NMR／MS联用仪。
HPLC／NMR的基本操作模式有连续流动模式(on - flow)、停流模式(stop—flow)和峰存贮模式(Peak parking or loop—collection)等三种。这三种模式各有特点，如连续流动模式的优点是一次分析可得到所有组分的NMR信息，缺点是所获得的NMR图谱质量较差；停流模式的优点是NMR谱图质量较好，缺点是存在明显的峰展宽，而且分析时间较长；峰存贮模式的特点是色谱峰被收集并暂时贮存到不同的毛细管回路内，由NMR谱仪逐一测定各流分。实际操作时，根据样品的特性和检测目的，可选择采用何种操作模式。
采用HPLC／NMR方法可对杂质含量在9％水平的药物杂质进行检测，方法简便、快速、准确。在药物杂质检测中，HPLC／MS测定和HPLC／NMR测定都是简便、快速的方法，但HPLC／NMR联用技术中NMR测定不受HPLC分离过程中使用的缓冲盐溶液的限制，并可以提供大量的结构信息。因此，HPLC／NMR联用技术是一种高效、快速获得混合物中术知化合物结构信息的技术，它在药物研究中的应用已日益广泛。