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YPD Plus 酵母扩增培养基
面议BD YNB 酵母氮源基础(无氨基酸和硫酸铵)
¥600BD Difco YNB酵母氮源基础(无氨基酸)
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¥298Minimal SD Base Gal/Raf 酵母基础培养基
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面议Y1HGold Chemically Competent Cell
酵母菌化学感受态细胞
温馨提示
见我司(懋康生物)整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay)产品专题。
产品关键词:
GAL4-AbA酵母单杂交系统;Y1HGold;pAbAi;pGADT7;Ar Qual;X-α-Gal ;Aureobasidin A (AbA);金担子素;
产品订购:
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2362-1000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 290 |
MF2362-5000UL | Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1320 |
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 保存 | 货号(规格) | |
MF2362-1000UL | MF2362-5000UL | |||
MF2362-A | Y1HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2362-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2362-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2362-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
产品描述
酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来,不同于双杂交用来研究蛋白-蛋白间的相互作用,单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。
Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。
Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura,用于表达pBait-AbAi构建子(通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得);后者筛选标志为Leu,用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于:基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株,当诱捕蛋白(prey)结合到诱饵序列(bait-DNA),GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达,这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素(Aureobasidin A,AbA)的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比,AUR1-C(AbAr)在很低浓度(100-200 ng/ml)下即可以有效杀死非抗性克隆,大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。
本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型
MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
使用方法
取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100℃ 孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µl,PEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30℃水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。
之后将管子放42℃水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。
5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。
用50 µl ddH2O重悬,涂板,放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
Y1HGold酵母化学感受态细胞
Y1HGold酵母化学感受态细胞