Rhod-4 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

（长波长Ca²⁺荧光探针Rhod-2的升级版本）

搜索关键词：

Rhod-4 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针；Rhod-2, AM；可见光激发波长Ca²⁺荧光探针；Fluo-4；Fluo-8 AM；CAS NO：129787-64-0；

产品描述

Rhod-2虽然是受换迎的红色荧光Ca²⁺荧光探针，但Rhod-2的线粒体定位和细胞中高基底Ca²⁺信号使其在某些细胞应用中严重受限制。另外，Rhod-2在488nm处很不理想的激发波长使其在某些只有488nm激发光源的仪器比如FLIPR^TM上信号很弱。

Rhod-4正是根据这些缺陷而改进的，具有以下特征：

A）Rhod-4的大激发和发射波长是530nm和555nm。虽Rhod-4大激发波长是530nm，但在488nm处

激发下的信号也相当强（见Fig 1）。除了能在514nm，532nm和546nm的长波长激发之外，Rhod-4用氩离子激发器在488nm激发下也能得到理想的荧光信号。Rhod-4随着增加的Ca²⁺浓度荧光信号而增强（555nm发射波长），一旦与Ca²⁺结合荧光约增强＞200倍。由于许多细胞受刺激后的Ca²⁺浓度提高通常是5~10倍，因此，Rhod-4是一款优秀的检测此范围内Ca²⁺浓度变化的高灵敏探针。

Fig 1, Rhod-4钠盐在含氯化钙体系内的激发光谱特征。

一旦受激动剂刺激后，Rhod-4在细胞内的荧光明显强于Rhod-2（信噪比）。更重要的是，Rhod-4主要

定位在细胞胞浆内，不像Rhod-2主要定位在线粒体。另外，Rhod-4具更低的温度依赖性的细胞加载特性，不管室温还是37℃产生相似的结果。这一特征使Rhod-4比Rhod-2在HTS应用中更有优势。

Rhod-4, AM是Rhod-2的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-4，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供，使用时只需经无水DMSO充分溶解，配置成2~5mM的储存液，并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

基本特性：

1）    同义名：Rhod-4, Acetoxymethyl Ester

2）    分子量：1015.96

3）    外观：红色固体

4）    大激发/发射波长：530/555 nm

5）    K_d（Ca²⁺结合）：525nM

6）    溶解性：溶于DMSO（2~5mM）

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2. 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3. Rhod-4, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4. Rhod-4, AM*次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

A. 试剂准备

1. 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：MS4301-1G）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2. HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

7） 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪，以及波长Ex/Em=530/555 nm来进行检测。

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Rhod-4 AM 长波长钙离子荧光探针

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