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产品名称 | 英文名称 | 货号 |
人脑成纤维细胞提取物说明书 | Human Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives | EYX99078 |
人脑成纤维细胞提取物【Human Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives】
人脑成纤维细胞提取物是从人原代脑成纤维细胞提取的,人原代脑成纤维细胞从正常人脑成纤维组织制备。正常人脑成纤维肌组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
手足口病肠道病毒(EV71)单重荧光PCR检测试剂盒48Ethyl 2-(3-cyano-hydroxyphenyl)-methyl,3-thiazole-carboxylate1617982
手足口病科萨奇A16病毒(CoxA16)单重荧光PCR检测试剂盒48Ethyl 2-(3-cyano-isobutoxyphenyl)-methyl-thiazolecarboxylate18445
手足口病EV71型/CoxA16型病毒双重荧光PCR检测试剂盒48Ethyl 2-(3-formyl-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617981
手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒48Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617979
诺如病毒G1/ G2分型双重荧光PCR检测试剂盒48Febuxostat143非布索坦
N4-Benzoylcytosine 26661-13-2 中文名:N4-苯甲酰基胞嘧啶 分子式:C11H9N3O2 DPD臭氧测定试剂盒 DPD ozone reage kit
Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone 3669-41-8 中文名:2,4-二羟基苯基苄酮 分子式:C14H12O3 臭氧快速试剂盒 Ozone rapid reage kit
5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate 13574-13-5 中文名:N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-苄酯 分子式:C17H23NO6 DPD余测定试剂盒 DPD residual test kit
N6-Benzyladenine 1214-39-7 中文名:N6-苄基腺嘌呤 分子式:C12H11N5 水样中离子(Hg2+)浓度测试盒 可见分光光度法 50管/48样
Benzidamine hydrochloride 132-69-4 中文名:盐酸苄达明 分子式:C19H24ClN3O 水样中六价铬离子(Cr6+)浓度测试盒 可见分光光度法 50管/48样
胰岛素样生长因子I(57-70) Insulin-like Growth Factor I (57-70) 质量规格:>95%,BR 小鼠尾加压素2受体(S2R)ELISA试剂盒 ,英文名: S2R ELISA Kit
胰岛素样生长因子Ⅱ(69-84) Insulin-Like Growth Factor II(69-84) 质量规格:>95%,BR 小鼠味觉受体1型成员2(TAS1R2)ELISA试剂盒 ,英文名: TAS1R2 ELISA Kit
白介素-1β转化酶底物 Interleukin-1β Convertase Substrate 质量规格:>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA检测试剂盒MousePepsinELISAKit 96T/48T
下钙素 Katacalcin 质量规格:>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA试剂盒 ,英文名: Pepsin ELISA Kit
肯普肽 Kemptide 质量规格:>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(PG)ELISA试剂盒 ,英文名: PG ELISA Kit
运动升压素 Kinetensin 质量规格:>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原A(PGA)ELISA试剂盒 ,英文名: PGA ELISA Kit
层粘连蛋白(925-933) Laminin (925-933) 质量规格:>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原C(PGC)ELISA试剂盒 ,英文名: PGC ELISA Kit
层粘连蛋白(929-933) Laminin (929-933) 质量规格:>95%,BR 小鼠胃动素(MOT)ELISA试剂盒 ,英文名: MOT ELISA Kit
层粘连蛋白九肽,酰胺 Laminin Nonapeptide, Amide 质量规格:>95%,BR 小鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒 ,英文名: MTL ELISA Kit
白细胞焦激肽(4-8);Pheromonotropic五肽 Leucopyrokinin (4-8);Pheromonotropic Pentapeptide 质量规格:>95%,BR 小鼠胃泌素(GAS)ELISA试剂盒 ,英文名: GAS ELISA Kit
人脑成纤维细胞提取物说明书Trenbolone heptanoate 中文名: 分子式:C25H34O3 鱼球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒
Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate 中文名:群勃龙环己甲基碳酸酯 分子式:C26H34O4 鱼类主要组织相容性复合体(MHC)ELISA试剂盒
Trenbolone acetate 中文名: 分子式:C20H24O3 愈创木酚 50g
Trenbolone 中文名:群勃龙 分子式:C18H22O2 Guaiacol 100g
Trehalose 中文名:海藻糖 分子式:C12H22O11 盐酸胍 100g
注意事项:
1. 接收到,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。