细胞系冻存程序
时间:2016-09-28 阅读:1533
细胞系冻存程序:
1) 单层细胞的消化。将经24~48小时培养已长成单层的传代细胞培养物弃去生长液,加适量ATV,1~2分钟后倒弃ATV,再加入少量ATV液,经0.5~1分钟倒去ATV,室温或37oC温箱作用2~3分钟,视细胞解离情况,拍打细胞培养瓶。使单层细胞*解离。SP2/0瘤细胞,待生长好后用吸管吹打,再经1 000转/ 分离心lO分钟。
2) 离心洗涤:向培养瓶内加5~1 0m1预冷的MEM使细胞悬浮,再将其吸出置灭菌离心管中,以1 000rpm 离心8~10分钟后弃去上清液。
3) 细胞悬液的制备:向离心管内逐滴缓慢加入预冷的冻存保护液,使细胞浓度为150~400万/ml,然后迅速分装于安瓿瓶中,每瓶加量为lml。