Elisa试剂盒对血清钙检测
时间:2014-12-23 阅读:418
长期以来,关于很多项目间交叉污染已屡见报道,如ALT对LDH正干扰、CK对GLU正干扰等,甚至也有Ca对ALT交叉污染的报道,然而对于Ca受 到的干扰却鲜见报端。
对18个项目进行Ca交叉污染初筛试验,结果显示有7个项目在常规检测条件下对Ca的干扰率超过3%,对以上7个项目进行试剂交叉污染确证 试验,结果与初筛试验基本吻合。常规检测项目确实可能对Ca产生负干扰性质的交叉污染。
之所以只选择各试剂的R1,是因为Ca为单试剂,将混合血清分出(N+1)份,每份100ul,*份加5Oul生理盐水,其余n份分别加相应项目试剂(R1)50ul,测定ca,重复5次计算均值,*份结果为对照值A2
其中Ca采用偶氮胂Ⅲ法,TBIL和DBIL采用钒酸盐法GLU采用氧化酶法,BUN采用*脱氢酶法,HDL.C和LDL.C采用直接法,其他都是IFCC推荐的常规方法。
运行系统清洗后,单独测定混合血清钙(ca)计算均值为对照值A1。仪器为日本谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总*(TBIL)、直接*(DBIL);肌酐(cR)为上海将来公司、尿酸(uA)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、α羟丁酸脱氢酶(HBD);二氧化碳(co2)、总*(Tc)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白*(HDL-c)、低密度脂蛋白*(LDL-c)。初筛交叉污染试验。将生化仪上18项其他项目
分别与Ca配对组合测定,样本为混合血清,重复5次计算均值,筛选出与对照值偏差(干扰率)≥3%的项目(数目为N)。由于ca的通道号在仪器上处于zui末位,反应时间也是各项目的zui大值10min,根据仪器检测顺序逻辑,Ca在任何组合中都是zui后开始检测。这样可以直接观察各项目试剂对Ca的交叉污染影响程度。 将上一步筛选出N个项目做交叉污染确证试验。
初筛试验以TBIL(钒酸盐法)、DBIL(钒酸盐法)干扰zui大,而确证试验则显示ALT(IFCC速率法)、AST(IFCC速率法)影响zui大。
随着*向高速度和样本、试剂微量化发展,交叉污染尤其是试剂间的交叉污染越来越突出。
在等同的测定条件下,在本实验众多常规项目中为了消除微量重金属导致的酶催化反应中的抑制作用,EDTA被广泛应用于酶类试剂或有酶促反应的试剂配制,本实验中试剂中可能含有较高浓度的EDTA,故对Ca造成了明显的负干扰,Ca受到负干扰现象zui先被发现,可见其抗*力较低,或存在Ca特异性污染源。
实验证明,试剂可对Ca测定产生严重负干扰,是可能施污染项目。经调查研究,可能是这些试剂中的螫合剂成份络合样品中的Ca所致。防范措施包括:加强仪器试剂针和搅拌棒清洗、增加试剂针清洗程序、变换项目检测通道顺序等。
为营造稳定的反应环境,生化试剂常添加柠檬酸盐等的螯合剂。有报道证实镁(Mg)试剂中EGTA成份对Ca造成了负干扰。而在TBIL 和DBIL试剂中,同时含有EDTA和柠檬酸盐,所以一旦污染,对Ca造成的负干扰尤其明显。
由此可见,其抗*力本身就存在天然缺陷,再 置身于众多潜在的污染源中间,遭受干扰的风险可想而知,必须引起实验室的重视,并采取对策加以防范。