HMVEC-L细胞培养(人肺微血管内皮细胞)
时间:2024-03-31 阅读:131
细胞:HMVEC-L细胞
中文名称:人肺微血管内皮细胞
生长特性:贴壁
培养基:MEM培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
收到细胞后请尽快更换配套培养基,或自己配置的新鲜培养基(含15%血清),如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时)。
HMVEC-L细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
布氏杆菌核酸扩增检测DNA提取:
1):全血:
(按下述步骤操作,可用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞)。将抗凝血摇匀,取500μl转至一洁净的1.5ml 离心管中,编号标记。
加入1ml 1×红细胞裂解液(RCLB,试剂盒配备10×RCLB,使用前请用双蒸馏水按1:9比例配制成1×RCLB),剧烈震荡30s,3,000g离心5min,弃上清。
重复裂解两至三次至无明显红色沉淀。 加入1ml生理盐水,剧烈震荡15s,13,000g离心1min,弃上清。
沉淀加50μl核酸提取液B 充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
2):增菌液:取1ml增菌液置入洁净的1.5ml离心管中,13,000g离心3分钟,弃上清,沉淀加50μl核酸提取液B 充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
3):奶:将10ml奶标本3,000g离心10min,弃上清,沉淀加1ml生理盐水,充分混匀,转至一洁净的1.5ml离心管中,13,000g离心1分钟,弃上清,沉淀加50μl核酸提取液B 充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
4):淋巴结等固体组织:取约100mg(50-100mg)组织,加入1ml生理盐水,充分研磨,后转至一洁净的1.5ml洁净离心管中,13,000rpm离心1分钟,弃上清,沉淀加50μl核酸提取液B 充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,取上清液4μl做PCR反应。
阴性质控品:取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B,充分震荡。后100℃裂解10分钟,然后13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
BS-阳性质控品:直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。