ELISA试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要，细节不容忽视，它是实验成功的关键与否；在这里本司为方便各位了解，更好的完成实验，特对高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳做出以下分析，供大家参考：

1. 吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。

2. 手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

3. 底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮肤。

4. 加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。

5. 作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

6. 剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

7. 同批号试剂组分不得混用。

8. 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

9. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

10. 要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定。

11. 在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

12. 检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。

13. 操作前仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进，比如洗板次数的掌握等。

14. 评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。

15. 加样要准确、快速。加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。另外，显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。

16. 使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要

17. 严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。

18. 洗涤*，洗板不*，酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外，洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。

19. 严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。

20. ELISA试剂盒检测操作步骤复杂，可强各环节的质量控制，才能得到准确可靠的检测结果。