zl-056664 小鼠胚胎成纤维细胞C3H/10T1/2, Clone 8

　　细胞名称C3H/10T1/2,Clone 8（小鼠胚胎成纤维细胞）

　　种属小鼠

　　年龄（性别）胚胎

　　组织来源胚胎

　　生长特性贴壁

　　细胞形态成纤维细胞样

　　背景描述C3H/10T1/2,Clone 8细胞是由C·Reznikoff等人于1972从C3H系小鼠胚胎细胞分离。C3H/10T1/2,Clone 8细胞对过度长满的细胞有丝分裂抑制非常敏感，在同源小鼠中不产生肿瘤，无自然转化的背景；C3H/10T1/2,Clone 8细胞也不含明显内源性转化鼠类白血病或肉瘤病毒。

　　生长培养基MEM＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完quan培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。收到细胞后第yi次传代建议T25培养瓶1：2传代。

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备DMEM（含NaHCO3 1.5g/L）基础培养基88%

　　优质胎牛血清10%

　　GlutaMAX-1谷an酰胺(推荐：1%

　　P/S青mei素-链mei素1%

　　2）该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。

　　3）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　4）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完quan培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。