名称BEAS-2B（人正常肺上皮细胞）（STR鉴定正确）

　　别称Beas-2B;BEAS2B;BEAS2B;Beas2B;BronchialEpitheliumtransformedwithAd12-SV402B

　　种属人

　　年龄（性别）男性

　　组织来源肺；支气管；正常；上皮；病毒转化

　　生长特性贴壁细胞

　　细胞形态上皮细胞样

　　细胞类型转化细胞系

　　生物安全等级2

　　生长培养基DMEM＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐传代比例1:2-1:3

　　推荐换液频率2~3次/周

　　冻存条件

　　冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件

　　气相：空气，95%；CO₂，5%

　　温度：37℃

　　致瘤性No,thecellswerenottumorigenicinimmunosuppressedmice

　　保藏机构AddexBio;T0007001/26ATCC;CRL-9609BCRJ;0395CCTCC;GDC0139ECACC;95102433KCB;KCB200922YJKerafast;ENH021-FPNCBI_Iran;C561

　　运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基）。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。收到细胞后第yi次传代建议T25培养瓶1：2传代。

　　一．培养基及培养冻存条件准备

　　1）准备IMDM；优质胎牛血清，20%;P/S1%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%完quan培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完quan培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完quan培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。