操作elisa过程中的问题造成假阳性
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2014/7/24 8:15:03>> 进入商铺上海科兴一家专业经营elisa试剂盒价格,elisa试剂盒厂家,elisa试剂盒报价,elisa试剂盒,人elisa试剂盒厂家,大鼠elisa试剂盒厂家,小鼠elisa试剂盒厂家专卖的公司,对elisa试剂盒操作过程中的问题作详细说明。
1加样
对于间接ELISA标本一般都要进行稀释,如果加样不准就会造成误差,尤其当稀释倍数大时,很小的误差,会导致较大的相对误差,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。目前,大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本,可较好地避免以上误差
2洗涤
在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步,应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作,得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关,ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
3 温育
每种试剂都有其*反应模式,其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高,反应时间长,会造成整板本底高,阳性率高。温育一般用湿盒或水浴 ,反应板不宜叠放,以保证各板温度都能迅速平衡,为避免蒸发,板上应加盖。
4酶标仪 判读
作为记录测定结果的仪器,酶标仪 的性能稳定与否,决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养,对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确,使用双波长,一个检测波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外,在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同,使用中应详细阅读说明书