人卵巢癌抗原（CA125）检测原理
人卵巢癌抗原（CA125）检测原理
背景介绍：
CA-125（癌抗原-125或糖链抗原-125），也被称为粘蛋白-16，是被MUC16基因所编码的蛋白质，是从上皮性卵巢癌抗原检测出可被单克隆抗体OC125结合的一种糖蛋白。来源于胚胎发育期体腔上皮，在正常卵巢组织中不存在。CA125是一种位于染色体19p13．2区域，并含有5797个碱基对的跨膜糖蛋白，属于IgG1。由于其氨基酸序列具有一些黏蛋白分子的特性，故将其命名为CA125（基因为MUC16），而且通过转染技术已经证实MUC16就是CA125。CA125相对分子质量为20万～100万，为高分子糖蛋白，外形呈环行结构，含24%的糖类，是一种类似黏蛋白的糖蛋白复合物，属于IgG。
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人卵巢癌抗原（CA125）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人卵巢癌抗原（CA125）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
操作注意:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。所有液体组分使用前充分摇匀。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果样本可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂盒性能
1. 检测范围：2 U/mL – 64 U/mL。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15%