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逆转录PCR需延伸时间解析

上海抚生实业有限公司

2024/12/17 16:14:03>> 进入商铺

用PCR仪扩增时,变性-退火-延伸循环完成后,继续72度延伸了10分钟的原因:

1、延伸时间取决于待扩增DNA片段的长度,当然是在反应体系一定的条件下。例如,使用TaqDNA聚合酶,72度时的碱基掺入率为35-100bp/s,因此延伸速率为1kb/min。

2、根据延伸速率推得,扩增1kb以内的DNA片段1min即可,而3-4kb则需要3-4min,依次照推。通常在最后一轮要适当的将延伸时间延长至4-10min,这样做是使PCR反应全以提高扩增产量。

3、继续72度延伸了10分钟除了可以使PCR反应全以提高扩增产量外,还有一个作用是:在用普通Taq酶进行PCR扩增时在产物末端加A尾的作用,可以直接用于TA克隆的进行。

 

 


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