晶抗生物大鼠小肠平滑肌细胞细胞复苏步骤
上海晶抗生物工程有限公司
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培养工作中,主要从以下几个方面来预防细胞支原体的污染:
A.控制环境污染
B.严格实验操作
C. 细胞培养基和器材要保证无菌
D.在细胞培养基中加入适量的抗生素
E,避免细胞污染,可以从预防着手,超净工作台物品放置要合理、进入细胞房要换鞋和穿实验服、实验员戴手套后要用酒精等消毒、避免
细胞交叉污染等等
培养准备和安装过滤器:
清洗好过滤器,干燥,放入一张孔径0,22um的微孔滤膜,用布包装好,15磅20 min进行商压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好,胶
管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中,出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤,过滤后要检査滤膜是否完好无损。
培养准备和安装过滤器:
清洗好过滤器,干燥,放入一张孔径0.22pm的微孔滤膜,用布包装好,15磅20 min进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好,胶
管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中,出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤,过滤后要检査滤膜是否完好无损。
保存应用及安全性:
保存应用:新鲜细胞,请于收到后放入二氧化碳培养箱内静置2-3小时后再进行实验操作;如是冻存细胞,收到后可放入液氨或-80℃冰箱
保存也可进行复苏操作。
安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞
的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后,在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
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细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞县液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加
1-2mL培养基后吹匀,然后将所有细胞县液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞是液加入10cm四中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二
天换液并检查细胞密度。
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D.质量保证:
严格的质量控制,通过全面的检测,是产品质量保证的基础
E.产品储存:收到产品后需放置在阴凉处或冷藏,切记放置在高温处
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