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特殊染色技术的应用

现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛， 这些技术要求一定的实验条件和试剂，如市面上使用广泛的徕卡染色机及其配套的徕卡透明试剂。相对而言，组织化学技术则具有无需复杂的实验条件和试剂、操作又比较简单的优势，在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。

组织化学染色的方法很多，这里仅介绍几种常用的组织化学染色在病理诊断中的应用。

一、胶原纤维的染色

凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵引力而不致撕裂。胶原纤维是原胶原互相错开1/4平行排列交联成胶原原纤维，胶原原纤维再聚合成较宽的结构。按胶原的化学成分可分为15种，间质中的胶原纤维主要由I、Ⅱ、Ⅲ型胶原组成，新鲜时呈白色，故又称为白纤维。在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。用染色液进行染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。

应用：

(1)器官硬化性疾病的观察：如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。

(2)瘢痕与淀粉样物质鉴别：前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。

(3)骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别：利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。

二、弹力纤维染色

弹力纤维是结缔组织发生形成较晚的一种纤维，在创伤修复中一般在4——5周才有较明显的弹力纤维形成。弹力纤维艰固、较小而弹性较大，容易伸展，在结缔组织起弹性作用。弹力纤维由弹性蛋白组成，新鲜时呈黄色又称黄纤维。弹力纤维纤维分枝连成网，折光性强，含量多时在HE染片上呈折光性强的粉红色，量少的不显色。故量多时与胶原纤维不易区别，量少则不能观察。弹力纤维染色主要用于观察弹力纤维有无增生、肿胀、断裂、破碎及萎wei缩或缺如等病变。

应用：

(1）动静脉的辨认：在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时，弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉，有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强，故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。

（2）心血管先天性弹力组织增生，这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。

（3）弹力纤维损伤性疾病：这组疾病有肺气肿、动脉粥样硬化、大动脉中层炎症等，弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。

（4）一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断：这组疾病有皮肤松驰症，萎wei缩性硬化性苔藓等，其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色，以观察弹力纤维变化。

三、色素染色（含铁血黄素及黑色素）

含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒，HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做含铁血黄素染色。

应用：

主要用于同其它色素鉴别，若为阳性，显示陈旧性出血。

黑色素常见于皮肤色素细胞，恶性黑色素瘤常可产生黑色素。组织内大量存在时呈棕黑色，易于鉴别。但少量存在时便难与其它色素相鉴别，须作黑色素染色。

应用：

（1）黑色素瘤的诊断与鉴别诊断：肿瘤细胞内色素是否为黑色素，染黑色素有助于确定黑色素性质及肿瘤的定性诊断。

（2）血色病与黑便病：真皮内有色素沉着，黑色素阴性而含铁血黄素阳性者可能为前者。

特殊染色的基本信息

为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括：胶原纤维染色（Masson等）、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸苏木素）、脂肪染色（苏丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。

Masson三色染色：胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染），肌纤维、纤维素红色，红细胞呈橘红色。

特殊染色的注意事项

1、染色前：

①切出的石蜡切片要好，不能有皱褶或者刀痕，切片不能太厚。

②捞片时，最好一张玻片捞一个组织，组织最好位于玻片的中间，美观的同时也利于脱蜡（有时二甲苯的液面低于组织片的时候，达不到脱蜡的目的）。

③石蜡切片脱蜡到水时，一定要注意组织切片脱蜡务必要彻di底（脱蜡时间不能太少）以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面，在染色时染色液未能充分与组织接触，最终导致染色效果不佳，甚至染不上颜色。

④在染色过程中最好不要在玻片上贴标签纸，以避免脱蜡时把标签纸也浸没，致使标签纸上的胶黏到玻片上，造成染色不佳。

⑤在染色前，用有色铅笔在组织周围划一个圈，这样在滴加染液时就不会使染液溢出。

2、染色时：

①染色时必须严格按照染色操作说明书进行染色。

②在染色过程中，前一个染液浸染完成后，在进行下一个染液的步骤之前，必须彻di底充分水洗，使前一个染液冲洗干净后再进行下一步骤。

③ 每次滴加染液前，务必吸干组织上多余的水分，避免多余的水把染液稀释了，造成染色不佳。

④在滴加染液时，务必使染液完wan全覆盖组织，但不能溢出圈外，避免浪费试剂。