碱性磷酸酶显色试剂盒检测原理
- 发布时间：2024/6/27 17:21:57
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碱性磷酸酶显色试剂盒检测原理
产品描述：
本试剂盒应用于胚胎干细胞（ES）和诱导多功能干细胞（iPS）的鉴定，以及免疫组化、免疫印迹等实验中的碱性磷酸酶显色。试剂盒内的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐（BCIP）/硝基四氮唑蓝（NBT）是碱性磷酸酶（AP）的常用底物之一，BCIP在AP的催化下会被水解生成强反应性产物，后者与硝基四氮唑蓝（NBT）反应生成不溶性产物，使之呈现深蓝色至蓝紫色。
操作指南:
1. AP显色工作液的配制：
取20μl 150×NBT溶液加入到3ml碱性磷酸酶显色反应缓冲液，充分混合均匀，再加入30μl 100×BCIP溶液，配置成工作液，如需改变工作液体积，可按相同比例适量配制。1h内使用。
2. 显色步骤:
a) 检测细胞的内源性碱性磷酸酶：吸出培养基，PBS润洗3次，加入4％多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入显色工作液，室温避光孵育5-30分钟，显色至预期深浅后，用PBS润洗1次，然后保存于PBS溶液中，显微镜下观察结果。
b) 检测组织切片或膜上结合的碱性磷酸酶抗体：使用洗涤液洗涤完后，加入适量工作液，保证完全覆盖样品表面，室温避光孵育5-30分钟，显色至预期深浅后，去除工作液，用蒸馏水清洗1-2次终止显色反应。
注意事项：
工作液应现配现用，配制好的工作液在一定时间内有效。
使用NBT时请采取必要的防护措施。
工作液用量必需充足，保证覆盖组织片或印迹膜。
为获得最佳实验结果，请务必优化如样品使用量、抗体稀释度、孵育时间等实验条件。
综上所述，BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒是一种功能强大、应用广泛的科研工具，能够帮助科研工作者准确、快速地检测和分析碱性磷酸酶的活性。