ADV核酸检测实验
- 发布时间:2023/10/29 19:57:16
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ADV核酸检测实验
实验目的:检测动物血清或血浆、肝、脾、淋巴结组织等样本中(ADV)DNA,其检测结果仅供临床参考。
实验原理:选取一对(ADV)特异性引物和一条特异性荧光探针,应用碱裂解法提取DNA,后者在耐热DNA聚合酶(Taq酶)作用下,配以FQ-Buffer(内含MgP2+P、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分,通过PCR-荧光探针体外扩增法对(ADV)进行扩增,从而达到快速实时定量检测之目的。
适用标本类型:疑似动物血清或血浆、肝、脾、淋巴结组织和咽拭子等样本。
标本采集:
血清:用无菌注射器抽取受检动物静脉血2毫升,注入无菌5ml干燥管(或含促凝剂),立即轻轻颠倒管子混合5至10次,密闭送检。
肝、脾、淋巴结等组织:取可疑部位组织1g,转至一洁净的1.5ml的离心管中,密闭送检。
保存和运输:标本可立即用于测试, 2-8℃保存下不应超过24小时; -70℃以下长期保存。避免反复冻融。标本运送时应采用0℃冰壶。
1.(标本预处理)血清、血浆等液体标本:吸取液体标本100ul至新的洁净的1.5ml离心管,加入100ul核酸提取液A,13,000rpm离心3min,去上清保留约50ul沉淀。
2.(标本预处理)肝、脾、淋巴结等组织:用适量灭菌生理盐水清洗送检的组织的血液;取大约100mg的组织,加入1ml的灭菌生理盐水用匀浆研磨成组织浆,移至新的1.5ml离心管,13,000rpm离心5min,去上清留沉淀;
DNA提取:向上述标本中加入50μl核酸提取液B充分混匀,100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min,备用。
阴性质控品:取50ul阴性质控品,加50ul核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4ul做PCR反应。
ADV阳性质控品:直接取4ul进行PCR扩增,或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。