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组织取材 。组织取材应尽可能新鲜。

 

增强组织的通透性和核酸探针的穿透性 。去污剂处理：最常应用的去污剂是Triton X-100，注意过度去污剂处理不仅影响组织的形态结构，而且还会引起靶核酸的丢失。蛋白酶处理：蛋白酶消化能使经固定后被遮蔽的靶核酸暴露，以增加探针对靶核酸的可及性。

 

杂交缓冲液孵育 。杂交前用不含探针的杂交缓冲液在杂交温度下孵育2h，以阻断玻片和标本中可能与探针产生非特异性结合的位点，达到减低背景的目的。

 

防止污染 。在整个杂交前处理过程中都需要戴消毒手套，实验所用玻璃器皿及镊子都应于实验前一日置高温烘烤（180℃）以达到消除RNA酶的目的。杂交前及杂交时所用的溶液均需经高压消毒处理。

 

双链DNA探针和靶DNA的变性 。杂交反应进行时，探针和靶核酸都必须是单链的。