晶抗生物流式细胞检测样本如何保存方法如下
上海晶抗生物工程有限公司
2023/7/3 9:11:54>> 进入商铺全血样本:一般来说,血液样本必须在6个小时内处理,晚不得超过12小时;做完染色后,需要放在多聚甲醛中保存,一般可以存放3天左右。
培养细胞样本:培养的细胞可以用多聚甲醛保存。做DNA倍体的样本:将样本保存在70%的乙醇中,并适量加入血清,-70℃冰箱保存,可以几个月内检测。
抗体染色的流式细胞不能立即检测该如何处理?
如果实验对细胞活性要求比较高,如凋亡实验,必须尽快检测;如果实验对细胞活性要求不高,可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定样本30分钟,固定后的细胞4℃过夜保存,次日检测。
同型对照的作用是什么?
抗体有时会和非抗原结合,可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。一个抗体非特异性相互作用和受体结合的情况,可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照。
什么时候需要使用同型对照?
做胞内流式实验:比如流式细胞胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
表面标志特异性不高或者不常见的: 一些特异性不高的抗体,如多抗,非特异性结合非常多,使用同型对照可排除假阳性; 因为不熟悉不常见标志的表达情况,根据同型对照可以判断阳性细胞的位置,对流式非常熟悉,且检测的是CD3、CD4、CD19等表达强度非常高的标志,可以不使用同型对照。
怎样选择同型对照?
一般选择与一抗的成分相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体比如抗人的CD56 FITC标记的抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,那么它的同型对照应该是FITC标记的Mouse IgG1,κ,如果是抗体的组合形式,纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照比如CD86的纯化抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,二抗是PE标记的抗小鼠IgG1,那么它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下:样本管,纯化的CD86+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本;同型对照管,纯化的同型对照+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本。
如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,优先选择的顺序是亚链不同--亚型不同--相同类别比如,某抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里找不到相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照;如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照;如果后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高?
首先需要检查同型对照是否加错类型、剂量等。其次,因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高,而跟其类似的抗原非常多,那么加入同型对照时,同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性,所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照,如空白对照等。