血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验原理您了解吗？
标签：血清脂蛋白琼脂 凝胶电泳 古朵生物
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验原理您了解吗？
原 理：
将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后，脂蛋白向正极移动，并分离为几个区带。
操 作：
1.预染血清：血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中，混合后置37℃水浴染色30分钟，然后离心(2000转/分，约5分钟)。
2.制备琼脂糖凝胶板：将已配制的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片，每片2.5ml，静置约半小时后凝固(天热时需延长，可放冰箱数分钟加速凝固)。
3.点加血清：已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出，然后用铜丝小匙将长方小条凝胶取出。以小片滤纸吸干小槽中水分，用血色素吸管吸取经过预染的血清约15μl，注入凝胶板上的小槽内。
4.电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中，样品应在阴极一端。两块三层纱布于巴比duo缓冲液中浸润，然后轻轻紧密贴在凝胶板两端，纱布的另一端浸于电泳槽内的巴比duo缓冲液(注意：此电极缓冲液不能用三羟甲烷缓冲液代替)。接通电源，电压为120~130V，每片电流为3~4mA。约经电泳15至55分钟，即可见分离之色带。
结果及临床意义：
1.正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最浅)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)，在原点处应无乳糜微粒。
2.如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，结合血清甘油三酯明显升高和胆固chun正常或略高，可以定为Ⅳ型高脂蛋白血症。
3.如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深染者，同时结合血清总胆guchun明显增高、甘油三酯正常者为Ⅱa型;若结合血清总胆guchun增高而甘油三酯略高的前β略溶者为Ⅱb型。
4.结果β-和前β-两区带分离不开连在一起称“宽β区带”，结合血清甘油三酯和胆guchun均有所增高，可定为Ⅲ型。
5.如果原点出现乳糜微粒，β，前β均正常或减低，结合血清甘油三酯明显升高，可定为Ⅰ型。
注意事项：
1.电泳样品要求为新鲜的空腹血清。
2.每一块凝胶上可平行挖两条小槽，因而可加两个样品。
3.如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片，在琼脂糖胶凝固前固定于适当位子上，当凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上留下小槽可直接加样，不需挖槽。
4.如果需要保留电泳样本，可将电泳后之凝胶板(连同玻片)放于清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。
试剂与器材：
1.巴比缓冲液(pH8.6，离子强度0.075)：为电极缓冲液
巴比duo15.4g，巴比duo2.76g，EDTA酸0.292g，加水溶解后加水至1000ml
2.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.6)为凝胶缓冲液
三甲基氨基甲烷1.212g，EDTA酸0.29g，NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml
3.琼脂糖凝胶
琼脂糖0.45g，三痉甲基氨基甲烷缓冲液50ml，水50ml
加热至沸，待琼脂糖溶解后立即停止加热。
4.挖槽工具制作
切口刀：刀口长15mm的刀片，中央夹一有机玻璃或木片，用螺丝固定，使两刀片相距1.5mm。挖槽小匙：用直径1.5mm的铜丝约6cm长，一端锤成扁平，用砂纸磨光。
5.电泳槽和电泳仪：同血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的仪器。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验原理您了解吗上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。