细胞冻存的步骤是什么?
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。
细胞冻存的步骤：
1、选择活力好，密度约80%的细胞，此时细胞处于对数生长期，比较适合冻存。细胞冻存依旧分为贴壁细胞冻存和悬浮细胞冻存。
2、显微镜下观察细胞状态,若细胞密度较高，培养基变黄，需要换液4h之后再进行冻存操作，细胞长满后，将培养皿中的培养基用枪小心的吸去。再用PBS冲洗一到两次,尽量吸干净润洗的PBS，加入胰酶消化细胞,消化一定要注意控制胰酶作用时间，消化细胞时由于每个细胞贴壁性不一样，消化时间差别会很大,胰酶消化是需要比较精细的操作，既要充分消化下细胞打散成单细胞悬液，均匀接种，又要避免消化过度造成细胞严重受损。大家用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，所以不能*规定消化时间，一般仪个人经验为准。
对于消化这步，建议按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37℃培养箱，然后每隔30秒，吹打下细胞，如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，之后混匀细胞时尽量轻柔，不要产生过多气泡。如果30秒不能分散，则再等30秒重复操作。
3、消化完成后加6-8ML*培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液。
4、900-1000rpm离心3分钟，弃上清,加入配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml,在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者,装有细胞的冻存管放入-4℃冰箱10分钟 ，然后放入-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
5、24小时后取出一只冻存管复苏，检查活性及是否污染。