超声波测厚仪的使用技巧
- 发布时间：2010/11/10 8:50:45
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英国剑桥医学研究委员会分子生物学实验室的Laura Easton等开发出一种快速、大规模纯化结构上均一的RNA的新方法。这种方法利用的是弱阴离子交换层析，它省略了上述这些繁琐的步骤，更快速地纯化大量RNA。文章发表在《RNA》杂志上。
整个过程如下：利用T7 RNA聚合酶对线性的质粒DNA进行转录之后，加入EDTA终止反应，并直接上样到DEAE-Sepharose FPLC柱上。zui初的流出液含有T7 RNA聚合酶及rNTP。之后一次洗脱出短的中断转录本、期望得到的RNA和质粒DNA。RNA的纯度和均一性由分子排阻层析来验证，而蛋白凝胶电泳证实了纯化的RNA中不含T7 RNA聚合酶。
RNA的大量合成一般是利用T7 RNA聚合酶对DNA模板进行体外转录，不过随后的纯化非常困难且耗时。利用高速液相层析系统（FPLC）的分子排阻层析能够从RNA产物中有效去除未掺入的NTP、中断的小转录本及模板DNA，但是需要多个准备步骤，如酚/氯仿抽提，以去除T7 RNA聚合酶，以及脱盐和样品浓缩。
利用这种新方法，研究人员能够在4小时内纯化长度在30-500 nt的体外转录RNA，RNA的回收率达90%以上。如果单体RNA和低聚RNA有着足够的电荷差异，那么也能将两者区分开。
此技术既排除了酚/氯仿抽提，也不需要对RNA变性，不仅简单省时，还能省钱。因为同位素标记的rNTP能够很轻松地从柱流出液中回收利用，这样又能节省一笔费用。