Probes for ROS 活性氧探针专题
Probes for Reactive Oxygen Species (ROS)
活性氧检测探针专题
一、基本介绍
活性氧类物质（Activated oxygen species, AOS），又称反应性氧类物质（Reactive oxygen species, ROS），体内的各种生理和病理过程都能生成。ROS的生理效应通过与大量易氧化的胞内物质反应来发挥，这些物质包括NADH，NADPH，抗坏血酸，组胺，色氨酸，酪氨酸，半胱氨酸，谷胱甘肽，蛋白质和核酸。ROS还能氧化胆固醇和不饱和脂肪酸，引起膜脂质氧化。
懋康生物提供一系列探针，能够生成或检测各种活性氧类物质（ROS），包括单线态氧（1O2），超氧阴离子（•O2–），羟基（HO•）和各种过氧化物（ROOR'）和氢过氧化物（ROOH），见表1 -活性氧检测探针和清除剂汇表。
活性氧类型 | 结构 | 活性氧检测探针 | 活性氧清除剂 |
Hydrogen peroxide 过氧化氢 | H2O2 | Dihydrorhodamine 123（二氢罗丹明123） H2DCFDA CellROX Orange reagent Luminol（鲁米诺） | Sodium pyruvate (10 mM) DMTU (10 mM) |
Hydroxyl radical 羟基 | HO• | APF HPF CellROX Green reagent CellROX Deep Red reagent | Mannitol (20–100 mM) DMSO (0.28 M) |
Hypochlorous acid 次氯酸 | HOCl | APF Dihydrorhodamine 123（二氢罗丹明123） Luminol（鲁米诺） |
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Nitric oxide 一氧化氮 | NO | CellROX Orange reagent DAF-FM diacetate Luminol（鲁米诺） | Carboxy-PTIO (100 µM) |
Peroxyl radical 过氧化基（包括过氧烷基和氢过氧自由基，当R=H） | ROO• | H2DCFDA Luminol（鲁米诺） | Trolox (10–100 µM) α-tocopherol (10–100 µM) |
Peroxynitrite anion 过氧亚硝基阴离子 | ONOO– | APF HPF CellROX Orange reagent H2DCFDA Coelenterazine（腔肠素） Dihydrorhodamine 123（二氢罗丹明123） Luminol（鲁米诺） | Ebselen (10–100 µM) uric acid (100 µM) |
Singlet oxygen 单线态氧 | 1O2 | Oxygen Sensor Green reagent trans-1-(2'-methoxyvinyl)pyrene | Sodium azide (1–10 mM) |
Superoxide anion 超氧阴离子 | •O2– | CellROX Green reagent CellROX Orange reagent CellROX Deep Red reagent Coelenterazine（腔肠素） Luminol（鲁米诺） MTT Mitosox Red Mitochondrial Superoxide | MnTBAP (100 µM) Tiron (10 mM) |
二、过氧化氢指示剂（Hydrogen Peroxide Probes）
过氧化氢（Hydrogen peroxide，H2O2）是一种反应氧代谢副产物，用于许多氧化应激相关态的关键调节剂，参与大量生理活动，比如哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变，肥胖症，许多神经衰退疾病和唐氏综合症。也许H2O2过氧化氢zui令人兴奋的生理作用在于近期报道，能转化分子氧为过氧化氢的抗体有助于免疫系统的正常识别和攻击。为此，H2O2过氧化氢的检测能够帮助研究者确定氧化应激是如何调控各种胞内信号通路的？
H2DCFDA(DCFH-DA, DCFH)，英文全名2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，中文全名2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯，是一种通用的氧化应激指示剂。具细胞膜渗透性，本身无荧光。一旦进入细胞后，被细胞酯酶水解生成2',7'-二氯二氢荧光素并进一步被氧化生成强荧光的2',7'-二氯荧光素（DHF），可用荧光光谱检测（Ex/Em=504/529nm）。H2DCFDA与胞内氧化应激产生的多种活性氧都有反应，包括过氧化氢（H2O2），过氧基（ROO•）和过氧亚硝基阴离子（ONOO-）。H2DCFDA普遍用来监测细胞氧化还原过程。
图1. H2DCFDA光谱图
产品信息：
品牌 | 货号 | 名称 | 规格 | 价格（元） |
MKbio | MX4801-1KIT | Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒 | 100~500T | 328 |
MKbio | MX4802-50MG | H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针 | 50mg | 546 |
三、羟基自由基指示剂（Hydroxyl Radical Probes）
细胞膜渗透性的氨基苯基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）是由T. Nagano开发的两种活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示剂，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更的特异性和稳定性。APF和HPF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF和HPF本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em=490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。
产品信息：
品牌 | 货号 | 名称 | 规格 | 价格（元） |
MKbio | MX4804-1MG | Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基荧光素 | 1mg | 2080 |
MKbio | MX4805-1MG | Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素 | 1mg | 2080 |
四、羟基自由基和超氧化物指示剂（Hydroxyl Radical & Superoxide Probes）
4.1 MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 线粒体超氧化物指示剂
线粒体超氧化物（Mitochondrial superoxide）是氧化磷酸化的副产物。一条紧密偶联的电子运传递链中约1-3%被消耗的线粒体氧不能*被还原，这些‘遗漏’的电子能与分子氧快速反应产生超氧阴离子，即线粒体中含量zui高的活性氧（ROS）分子。细胞过氧化物生成量的增加在心血管疾病中得到阐释，这些疾病包括高血压、动脉粥样硬化和糖尿病相关的血管损伤，以及神经退化疾病如帕金森疾病，阿尔茨海默病和肌萎suo性[脊髓]侧索硬化（ALS）。
MitoSOX红色线粒体超氧化物荧光探针（MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator）是二氢乙啶（dihydroethidum，DHE）的一种阳离子衍生物，特别设计高度特异性检测活细胞线粒体超氧化物。
MitoSOX Red是一种特异性靶向活细胞线粒体的新型荧光探针，具细胞膜渗透性，且能快速和选择性结合线粒体。一旦进入线粒体，被超氧化物氧化，与核酸结合后产生很强的红色荧光。MitoSOX Red能够立即被超氧化物，并不是其他ROS-或RNS（活性氮）生成系统氧化。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase
，SOD）能够预防MitoSOX Red被氧化。
MitoSOX Red可用于在对活细胞线粒体释放的超氧化物的直接检测中区别纯化线粒体的人为误差。另外，MitoSOX Red是一种有价值的工具，用来筛选多种疾病中调节氧化应激的药物。
MitoSOX Red订购信息：
货号 | 产品名称 | 规格 | 报价（元） | 小包装供货 |
M36008 | MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 红色 | 10x50 µg | 3,855.00 | 是（50 µg） |
以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装，原始包装为10x50 µg（10支50µg单个包装构成）。我司对M36008进行拆开销售，特惠价为650元/支，单支50µg，现货销售，欢迎订购。
4.2 CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化应激试剂
氧化应激是由于反应性活性氧物质（ROS）产量和细胞清除ROS的不平衡导致的。ROS与核酸，蛋白质和脂质反应导致细胞和组织损伤，使用选择性或广泛性探针来测定。
CellROX试剂是用来检测细胞广泛存在氧化应激的荧光探针，结果可用传统荧光显微镜、高内涵筛选、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。有些能用福尔马林固定从而可与包括抗体在内的其他荧光试剂轻松进行多重标记【见表2- CellROX试剂的选择指导】。
| CellROX Deep Red Reagent | CellROX Orange Reagent | CellROX Green Reagent |
Readout | CellROX探针本身是还原态，无荧光，一旦氧化后发亮绿色、橘色或深红色荧光。CellROX具细胞膜渗透性，能轻松加载进入活细胞。 | ||
Common filter set | Cy5 | RFP | FITC |
Ex/Em (nm) | 640/665 | 545/565 | 485/520 |
Live cell–compatible | Yes | Yes | Yes |
Labeling in complete medium | Yes | Yes | Yes |
Formaldehyde-fixable | Yes | No | Yes |
Detergent-resistant | No | No | Yes |
Photostability |
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Signal-to-noise ratio |
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CellROX实例图片：
图3. Angiotensin II Induced Oxidative Stress Measured with CellROX™ Green Reagent in Human Aortic Smooth Muscle Cells.
Angiotensin –II induced oxidative stress in human smooth muscle cells (HASM) measured with CellROX™ Orange Reagent. HASM cells were plated on glass bottom 35 mm MatTek dishes. The cells were treated with or without 500 nM angiotensin-II for 4 hr at 37° C. The cells were then stained with 5 µM CellROX™ Green Reagent and Hoechst 33342 by adding the probes to complete media and incubating at 37° C for 30 min. The cells were washed with PBS and imaged on a Zeiss Axiovert inverted microscope using a 40x objective. Angiotensin-II treatment leads to increased oxidative stress.
CellROX订购信息：
货号 | 产品名称 | 规格 | 报价（元） | 小包装供货 |
C10422 | CellROX Deep Red Reagent 深红色 | 5 x 50 uL | 6095 | 否（50 µl） |
C10443 | CellROX Orange Reagent 橙色 | 5 x 50 uL | 5827 | 否（50 µl） |
C10444 | CellROX Green Reagent 绿色 | 5 x 50 uL | 5833 | 是（50 µl） |
以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装，原始包装为10x50 µg（10支50µg单个包装构成）。我司对C10444进行拆开销售，特惠价为1845元/支，单支50µl，现货销售，欢迎订购。
五、一氧化氮指示剂（Nitric acid NO Probes）
一氧化氮（NO）自由基是一种重要的细胞信号分子，参与许多生理和病理过程。作为一种重要的生物调节剂，因此是神经科学、生理学和免疫学的基本组成成分。是一种强效的血管舒张剂，只有几秒钟的短暂半衰期。低水平的NO生成能保护器官，比如缺氧损伤的肝脏。
DAF-FM DA是一种细胞膜渗透性的一氧化氮（NO）荧光探针，Ex/Em=495/515nm。DAF-FM DA主动扩散穿透细胞膜，一旦进入细胞，胞内酯酶使其去乙酰化生成DAF-FM。DAF-FM本身荧光很弱，其荧光量子产率~0.005，但与NO反应后荧光增强约160倍，光量子达到~0.81。与zui早的NO探针-DAF-2相比，DAF-FM具有以下几个优势：1）DAF-FM与NO形成的加合物的光谱不依赖pH（＞5.5）；2）DAF-FM与NO形成的加合物的光稳定性明显强于DAF-2/NO加合物；3）DAF-FM的NO检测下限~3nM，比DAF-2灵敏度高（~5nM）。
产品信息：
品牌 | 货号 | 名称 | 规格 | 价格（元） |
MKbio | MX4702-1MG | DAF-FM DA 一氧化氮（NO）荧光探针 | 1MG | 4285 |
MKbio | MX4703-100T | DAF-FM DA (5mM in DMSO) 一氧化氮（NO）荧光探针 | 100T | 948 |
MKbio | MX4704-100UG | DAF-2 DA 一氧化氮（NO）荧光探针 | 100μg | 798 |
- 其他指示剂
品牌 | 货号 | 名称 | 规格 | 价格（元） |
MKbio | MX4455-1MG | Dihydrorhodamine 123 (DHR 123) 二氢罗丹明123 | 1mg | 528 |
MKbio | MM0706-1G | Luminol 鲁米诺 | 1g | 120 |
MKbio | MX4704-100UG | DAF-2 DA 一氧化氮（NO）荧光探针 | 100μg | 798 |
MKbio | MX4606-500UG | Coelenterazine Native 天然腔肠素 | 500μg | 598 |
MKbio | MX3004-250MG | MTT 噻唑兰 | 250mg | 70 |
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供产品。