在进口原装ELISA试剂盒中Z常用的酶为HRP和ALP
- 发布时间：2017/6/29 9:23:00
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（1）进口原装ELISA试剂盒HRP：是一种糖蛋白，含糖量约18％，分子量为44kD，在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素） 结合形成一种卟啉蛋白质。主酶为五色糖蛋白，在275nm波长处有zui高吸收峰；辅基是深棕色的含铁卟啉环，是酶的活性基团，在403nm波长处有zui高吸收峰。HRP的纯度用纯度值（reinhartzahl，RZ）表示，RZ＝A403nm／A275nm，即403nm的吸光度与280nm的吸光度之比，高纯度HRP的RZ值应≥3．0。HRP质量的另一重要指标是酶活力，以单位（unit，U）表示。用于标记的HRP比活性应≥250U／mg。HRP的作用底物为H202，催化下列反应；
DH2+H202 HRP D+2H2O
上式中DH2为供氢体（即底物），H2O2为受氢体。HRP对受氢体的专一性很高，除H2O2外，仅作用于小分子醇和尿素的过氧化物。HRP的底物有多种，在ELISA中常用的有：邻苯二胺（orthophenylenediamine，OPD），四甲基联苯胺（3，3，5，5- tetramethyl-benzidine，TMB）和2，2，-连氮基-双-3-乙基苯噻唑啉磺酸盐[2，2，-azino-bisc（3- ethyl-benzthiazolinesulfonate-6），ABTS]。进口原装ELISA试剂盒三者各有优缺点：OPD是在ELISA中应用zui多的底物，灵敏度高，比色方便，但配成溶液后稳定性差，且有致异变性；TMB经酶作用后由五色变蓝色，加酸终止反应后显黄色，目测对比鲜明，可比色定量，溶液的稳定性也较差，但无致异变性，因此应用日见增多；ABTS虽然灵敏度不如OPD和TMB，但空白值很低。
（2）ALP：是一种磷酸酯的水解酶，用做示踪酶的ALP活性应在l 000U／mg以上。ALP常用的底物为对硝基苯磷酸盐（PNP），降解产物为黄色的对硝基酚。经NaOH终止酶反应后，颜色维持比较稳定。
在ELISA试剂盒中酶作用于底物后生成有色物质、荧光物质或导致化学发光，分别可用分光光度计、荧光光度计测量及照度计测量。荧光和化学发光测定的敏感度均高于比色测定，标准曲线的线性范围亦较比色反应宽，测定效果优于常用的比色进口原装ELISA试剂盒。