单克隆抗体制备---单克隆抗体的大量生产及鉴定
1.单克隆抗体的大量生产
大量生产单克隆抗体的主要方法：
（1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从一清液中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液内抗体含量为10～60μg/ml,如果大量生产，费用较高。
（2）体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。
2.单克隆抗体的鉴定
对制备的McAb进行系统的鉴定主要包括以下几个方面：
（1）抗体特异性的鉴定
除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验，方法可用ELISA、IFA法。例如：制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体
（2）McAb的Ig类与亚类的鉴定
一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型。如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM，则检测出来的抗体一般是IgG类或IgM类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心ELISA来确定。在作双扩试验时，如加入适量的PEG（3%），更有利于沉淀线的形成。
（3）McAb中和活性的鉴定
用动物或细胞的保护实验来确定McAb的生物学活性。例如，如果确定抗病毒McAb的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感的动物或敏感的细胞，来观察动物或细胞是否得到抗体的保护。
（4）McAb识别抗原表位的鉴定
用竞争结合试验，测相加指数的方法测定McAb所识别抗原位点，来确定McAb的识别的表位是否相同。
（5）McAb亲合力的鉴定
用ELISA或RIA竞争结合试验来确定McAb与相应抗原结合的亲合力。