鳖孕酮(P)Elisa试剂盒操作步骤
1.
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
80μg/L
5 号标准品
150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
40μg/L
4 号标准品
150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
20μg/L
3 号标准品
150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
10μg/L
2 号标准品
150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
5μg/L
1 号标准品
150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.
配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5.
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.
温育：操作同 3。
8.
洗涤：操作同 5。
9.
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。

鳖孕酮(P)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鳖孕酮(P)水平。用纯化的鳖孕酮(P)抗体包被微
孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入孕酮(P)，再与 HRP 标记的孕酮(P)抗体
结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP
酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕酮(P)
呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鳖孕
酮(P)浓度

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