小鼠血糖酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相
关液体样本中血糖的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血糖水平。用纯化的小鼠血糖抗体包被微
孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血糖，再与 HRP标记的血糖抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血糖呈正相关。
用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠血糖浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成
说明书
48孔配置
1份
96孔配置
1份
保存
封板膜
2片（48）
1个
2片（96）
1个
密封袋
酶标包被板
标准品：36mmol/L
标准品稀释液
酶标试剂
1×48
1×96
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3ml×1瓶
20ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6ml×1瓶
30ml×1瓶
样品稀释液
显色剂 A液
显色剂 B液
终止液
20倍浓缩洗涤液
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心  20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20  分钟后，离心
20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用  PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心   20分
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
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用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBS（PH7.4），用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品，因     NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠血糖酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在*、第二孔中分别加标
准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液  50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉，再各取  50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取 50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液   50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为  50μl，
浓度分别为 24mmol/L，16mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，        2mmol/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样
品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液：将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水  20倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液    50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
小鼠血糖酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡  15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值
大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
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8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的  OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R值为  0.990以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和  11%
检测范围：
1mmol/L –32mmol/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月