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天冬氨酸-*特异性蛋白酶家族抗体动物体内单抗的方法迄今为止,通常情况下均采用动物体内单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得,因此使用的动物当然*BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,在小鼠腹腔内生长杂交瘤,并产生腹水,因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。可见该法操作简便、经济,不过,腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险,故而用SPF级小鼠。 天冬氨酸-*特异性蛋白酶家族抗体A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液体石蜡。c. 处于对数生*的杂交瘤细胞。
B、方法:a. 腹腔接种降植烷或液体石蜡,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接种用PBS或无血清培养基稀释的杂交瘤细胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 间隔5天后,每天观察小鼠腹水产生情况,如腹部明显膨大,以手触摸时,皮肤有紧张感,即可用16号针头采集腹水,一般可连续采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 将腹水离心(2000r/min 5分钟),除去细胞成分和其他的沉淀物,收集上清,测定抗体效价,分装,-70℃冻存备用,或冻干保存。(2) 体外培养单抗的方法总体上讲,杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以进行单层细胞培养,又可以进行悬浮培养。
公司产品详情请参阅有关详细论述链接点击: Mouse phosphatidylinositol antibody IgG/IgM,PI Ab-IgG/IgM 小鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
Mouse 15-lipoxygenase,15-LO/LOX 小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)
Mouse Interferon β,IFN-β/IFNB 小鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)
Mouse Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ 小鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
Mouse Serum amyloid A,SAA 小鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)
Mouse anti-centrol and centrosome antibody,ACA 小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)
Mouse Haptoglobin,Hpt/HP 小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)
Mouse 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 小鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)
Mouse α1-Acid glycoprotein,α1-AGP 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)
Mouse Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 小鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)
Mouse cholest erolester transfer protein,CETP 小鼠*酯转移蛋白(CETP)
Mouse luteotropic hormone,LH 小鼠促黄体激素(LH)
Mouse angiotensinogen,aGT 小鼠血管紧张素原(aGT)
杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室zui常用的手段,即将杂交瘤细胞加入培养瓶中,以含10-15%小牛血清的培养基培养,细胞浓度以1×106-2×106/ml为佳,然后收集培养上清,其中单抗含量约10-50ug/ml。显然,这种方法制备的单抗量极为有限,无疑是不适用于单抗的大规模。要想在体外大量制备单抗,就必须进行杂交瘤细胞的大量(高密度)培养。单位体积内细胞数量越多,细胞存活时间越长,单抗的浓度就越高,产量就越大。