ELISA试剂盒细胞裂解方法

为了不让生活留下遗憾和后悔，我们应该尽可能抓住一切改变生活的机会。细胞裂解是改变细胞通透性和活性的重要实验方法。那么，到底要如何裂解细胞呢？

对于培养细胞样品：

1.融解ripa裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，使pmsf的终浓度为1mm。

2.对于贴壁细胞：去除培养液，用pbs、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的page、western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：

1.把*切成细小的碎片。

2.融解ripa裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，使pmsf的终浓度为1mm。

3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的page、western和免疫沉淀等操作。

6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。