上海恒远生物RIPA裂解液使用说明

细胞、组织蛋白的提取过程要求细胞充分裂解，得到可溶性蛋白，并保证蛋白不被降解，及其免疫学反应性、生

物学活性不受干扰。

Amresco公司生产的RIPA裂解液*符合要求，对哺乳动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是zui常用

细胞组织快速裂解液。使用该裂解液提取得到的蛋白，可用于蛋白纯化、蛋白浓度测定、免疫共沉淀、western blotting

等后续蛋白分析。该RIPA裂解液减少了非特异蛋白的结合，用于免疫分析时有助于降低背景，保证蛋白相互作用等研 究的顺利进行。

Amresco公司提供的RIPA裂解液为即用液，可立即进行蛋白提取，省去了自备提取试剂的大量时间。提取易降解的蛋白 或磷酸化蛋白时，还须在该裂解液使用前加入适量的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。对大多数贴壁哺乳动物细胞系来说，

1 ml RIPA裂解液可用于裂解107个细胞或100 mm dish所培养的细胞。

使用说明

?          对于培养细胞样品

1. 溶解RIPA裂解液,混匀，在使用前加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM；

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，缓慢滴加适量PBS洗涤两次（注意不要使细胞脱落），以去除残余培养基中对蛋白 提取产生干扰的血清蛋白及其他可能导致污染的物质，吸去PBS后，加入适量预冷的裂解液(1 ml per 107 cells/

100 mm dish/150 cm2 flask)，置冰上或冰箱（2-8 ℃）静置5 min，之后迅速用细胞刮子刮取贴壁细胞，在冰上将细 胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，轻柔混匀以使细胞充分裂解，裂解后没有明显细胞沉淀；

对于悬浮细胞：450 g离心5 min收集细胞，缓慢滴加PBS洗涤，并用手指轻弹以充分悬浮细胞，450 g离心5 min 弃上清后，重复洗涤一次，离心收集细胞，按照1 ml per 107 cells/100 mm dish/150 cm2 flask的比例加入裂解液， 轻柔重悬细胞后置冰上或冰箱（2-8 ℃）静置5 min，轻柔混匀以使细胞细胞充分裂解，裂解后没有明显细胞沉淀；

4. 4 ℃，12000 rpm离心10 min（根椐细胞种类不同调整离心力），置冰上轻轻吸取上清，即可进行后续的

SDS-PAGE、Western、IP等实验。

?          对于组织样品

1. 用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解；

2. 溶解RIPA裂解液,混匀，在使用前加入PMSF，使PMSF的终浓度为1 mM；

3. 按照每约30 mg组织加入约300 ìl预冷的裂解液（如果裂解不充分，可以适当添加裂解液，如果需要高浓度的蛋白 样品，可以适当减少裂解液的用量）；

4. 用玻璃匀浆器冰浴匀浆，直至组织充分裂解，裂解后没有明显组织颗粒沉淀；

5. 充分裂解后，4 ℃离心12000 rpm，10 min，轻轻吸取上清，即可进行后续的SDS-PAGE、Western、IP等实验。