ELISA试剂盒的组成和操作步骤
时间:2017-03-14 阅读:3673
今天天气晴朗,一扫昨日阴雨天气,暖暖的太阳让这传自西方的白se情人节更显温馨,上海恒远生物科技有限公司给大家带来美好的节日祝福。下面我们言归正题,跟大家介绍ELISA试剂盒组份和操作步骤。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液
(7)酶反应终止液。
ELISA试剂盒操作步骤:
1. 加标准品:在酶标包被板上设标准品孔,依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,
然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔加入酶标试剂50μl。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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