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如何选择高品质的骨髓瘤细胞做细胞实验

时间:2015-08-12      阅读:1623

细胞越来越受广大科研者的喜爱,但细胞的生命力不像人们想象中那么强大,在培养复苏等过程中稍有不慎就不可能导致它的死亡。与此同时越来越多关于细胞的实验客户会选用骨髓瘤细胞。原因主要有以下两点,同时选择合适的骨髓瘤细胞必须满足四个条件:
一、骨髓瘤细胞具有无限分裂能力,由于该细胞并非高度分化细胞,因此分裂能力较强,而其它肿瘤细胞分裂能力较弱,因此多在制备单克隆抗体时与B淋巴细胞融合,使单克隆抗体迅速大量增殖。

二、同时骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,这样的瘤细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。
三、选择骨髓瘤细胞的条件:①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致;②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外;③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度,106个细胞/ml;④生长速度快,繁殖时间短。
目前常用的Balb/c小鼠产生的骨髓瘤细胞株有:①S194/5XXO?BU?1;②SP2/0—Ag14(简称SP2);③P2—X? ?—Ag8?6?5?3(简称653);④FO
以653zui为常用,它是由矿物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)诱发出来的一种浆细胞瘤(Minerol Oil plasmacy toma,MOPC)并经过培育形成一株8-氮鸟嘌呤有抵抗力的亚系。
骨髓瘤细胞一般由有关单位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,试验时复苏、增殖、传代即可。
由于骨髓瘤细胞是半贴壁状态,很容易脱落,因此不需要胰酶处理。为了防止出现返祖现象,在融合前,可将培养基内加入15μg/ml 8-氮鸟嘌呤。取约1×107~6×107对数生长期(即培养15h~20h)的骨髓瘤细胞,在室温离心(400g)10min,沉淀以2.5%FCS—1640液再悬浮并计数。

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